低分子量透明质酸增强HAV抗原诱导的小鼠体液免疫应答的研究
作者：舒晓明, 胡凝珠, 兰芸, 陶里, 陈阳, 罗爱华, 胡云章
【摘要】 目的: 研究内源性危险信号分子低分子量透明质酸作为天然佐剂对HAV抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法: 将ICR小鼠分成9组, 分别设生理盐水对照组、 HAV抗原组、 HAV抗原+铝佐剂组、 HAV抗原+低分子量透明质酸50 μg组、 HAV抗原+低分子量透明质酸100 μg、 HAV抗原+低分子量透明质酸200 μg、 HAV抗原+低分子量透明质酸300 μg、 HAV抗原+低分子量透明质酸500 μg、 HAV抗原+低分子量透明质酸1 mg组, 皮下免疫小鼠。分别在4、 8、 12 、 16周用ELISA法检测小鼠血清抗HAV IgG水平。结果: （1）空白对照组在4、 8、 12 和16周未见抗HAV IgG产生; 各实验组抗HAV IgG水平在8周时达到最高; 12周和16周时各免疫组的抗HAV IgG水平逐渐下降, 尤以铝佐剂组下降明显; （2）与HAV抗原组相比, 低分子量透明质酸各免疫组小鼠血清抗HAV IgG水平明显升高（P<0.05）; 与铝佐剂组相比, 低分子量透明质酸免疫组明显增强特异性抗HAV IgG水平（P<0.05或P>0.05）; （3）低分子量透明质酸安全无毒, 无过敏反应。结论: 低分子量透明质酸能够明显增强灭活HAV抗原的体液免疫应答, 具有强的免疫佐剂作用。其免疫佐剂效应优于铝佐剂。 免费论文
【关键词】 透明质酸 危险信号 佐剂 理学论文
免疫佐剂对辅助抗原诱导机体产生持久高水平的免疫应答十分重要[1], 透明质酸（hyalouronan acid, HA）是从动物组织提取的一种黏多糖, 由（1酸和（1
β
3）N
乙酰基
D
β
4）D
葡糖醛
氨基葡糖双糖单位重复连接组成。透明质酸是细胞
外基质的重要成分而广泛分布于细胞外基质, 它是构成皮肤、 玻璃体、 关节滑液和软骨组织的重要成分, 具有独特的理化性质和生物学功能。近年研究表明, 低分子量透明质酸是免
疫系统的一种重要内源性危险信号, 与TLR关激酶、 TNFR相关因子
2作用后, 以依赖于MyD88、 IL1R相
6、 蛋白激酶Cζ、 NFκB的方式进行信号传导, 激活机体
的天然免疫应答[2]。因此我们推测低分子量透明质酸可能具有免疫佐剂的特性。本研究中以低分子量透明质酸作为疫苗佐剂, 与HAV抗原混合后皮下免疫接种小鼠, 观察内源性危险信号分子低分子量透明质酸对HAV抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响, 以探讨低分子量透明质酸作为疫苗佐剂的可行性。 理学论文
1 材料和方法
1.1 材料 ICR健康小鼠(SPF级, 雌性, 6～8周龄, 质量18～20 g), 由医学院北京协和医学院医学生物学研究所灵长类实验动物中心提供, 并按实验动物中心的方法饲养。酶标仪（Bio
RAD Microplate reader Model 550）购自美国Bio
RAD公司。抗
HAV IgG ELISA检测试剂盒购自KPL公司, 酶标板购自美国eBioscienc公司。灭活HAV抗原和Al(OH)3佐剂均由本室保存。低分子量透明质酸（相对分子量（Mr）为10000以下）购自江苏镇江东元生物科技有限公司。
1.2 方法
1.2.1 低分子量透明质酸的制备 用天平称取适量低分子量透明质酸, 用蒸馏水溶解配制成浓度为5 μg/L。
1.2.2 免疫动物 将ICR雌性小鼠随机分成9组, 分别设生理盐水空白对照组、 HAV抗原200 μg免疫组（HAV）、 HAV抗原200 μg+300 μg铝佐剂免疫组（HAVAL）、 HAV抗原200 μg+50 μg透明质酸免疫组（HAVHA1）、 HAV抗原200 μg +100 μg透明质酸免疫组（HAVHA2）、 HAV抗原200 μg +200μg透明质酸免疫组
（HAVHA3）、 HAV抗原200μg +300μg透明质酸免疫组（HAVHA4）、 HAV抗原200 μg +500 μg透明质酸免疫组（HAVHA5）和HAV抗原200 μg +1 mg透明质酸免疫组（HAVHA6）, 每组6只。免疫途径为皮下免疫, 共免疫1次。
1.2.3 血清抗HAV IgG水平检测 分别于免疫后4、 8、 12和16周对小鼠尾静脉采血, 血样37℃放置1 h后, 4℃过夜, 分离血清, 用ELISA试剂盒检测抗HAV的特异性IgG水平, 具体操作方法按照试剂盒说明书。
1.2.4 低分子量透明质酸安全性检测 （1）低分子量透明质酸的异常毒性试验: 实验组选用ICR小鼠10只, 雌雄各1半, 每只小鼠皮下注射5 mg低分子量透明质酸, 同时设立生理盐水对照组, 连续观察7 d。（2）低分子量透明质酸的刺激性试验: 取ICR小鼠2只, 分别在一侧后肢股四头肌注射低分子量透明质酸（5 μg/L） 1 mL, 另一侧注射等量生理盐水。另取ICR小鼠2只, 分别在一侧后肢脚掌注射低分子量透明质酸（5 μg/L） 1 mL, 另一只注射等量生理盐水。48 h后处死, 解剖观察局部组织变化。（3）低分子量透明质酸的过敏试验: 取ICR小鼠10只, 雌雄各1半, 皮下注射50 μg低分子量透明质酸, 2周后再尾静脉注射50 μg低分子量透明质酸, 立即观察有无过敏反应。
1.2.5 统计学分析 采用SPSS11.5统计软件进行单因素方差分析, 并进行Levene方差齐性检验, 如方差齐, 则进行单因素方差分析; 而方差不齐则采用KruskalTest, P<0.05具有统计学意义。
Wallis H
（—临床医学）
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