反相高效液相色谱法测定盐酸克林霉素棕榈酸酯颗粒的含量

反相高效液相色谱法测定盐酸克林霉素棕榈酸酯颗粒的含量

[摘要] 目的: 采用反相高效液相色谱法测定盐酸克林霉素棕榈酸酯颗粒的含量。方法: 色谱柱为phenomenex-C18（4.6mm×250mm，5µm），流动相为甲醇:水:冰乙酸=172:27:1；检测波长为280nm；流速为2.0mL/min；进样量10μL。结果: 克林霉素棕榈酸酯在0.16～3.20mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，r = 0.9992，日间、日内RSD均小于1.5%。结论:本方法准确可靠，可用于盐酸克林霉素棕榈酸酯颗粒的质量控制。 [关键词] 盐酸克林霉素棕榈酸酯;含量测定；高效液相色谱法

RP-HPLC determination of content of Clindamycin Palmitate Hydrochloride Granules

Zheng Xi-zi.( Department of Pharmacy , People’s Hospital of Changshou, Chongqing, Chongqing 401220 , China)

[Abstract] Objective : An reversed phase high performance liquid chromatograph (RP-HPLC) method was established for determination of content of Clindamycin Palmitate Hydrochloride Granules. Methods : The chromatographic analysis was performed on a phenomenex-ODS (4.6mm×250mm，5µm). The mobile phase consisted of methanol, water, and glacial acetic acid (172:27:1). The detection wavelength was at 280 nm. The flow rate was 2.0 mL . min-1, with injection volume 10μL. Results : There was a good linear relationship within the range of 0.16~3.20 mg/mL (r = 0. 9992). The reproducibility and precise of method was good. Conclusion : This method is accurate, specific and can be used for the qulity control of Clindamycin Palmitate Hydrochloride Granules.

[Key word] Clindamycin Palmitate Hydrochloride; content determination; RP-HPLC

盐酸克林霉素棕榈酸酯是克林霉素的衍生物，体外无抗菌活性，在体内经酯酶水解形成克林霉素而发挥抗菌活性。本品对金黄葡萄球菌和表皮葡萄球菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌等均有较好的抗菌作用，对流感嗜血杆菌及淋病奈瑟氏球菌中度敏感。部分耐红霉素的金黄葡萄球菌、表皮葡萄球菌对本品仍敏感。对革兰氏阴性和革兰氏阳性厌氧菌均有较好的抗菌作用。盐酸克林霉素棕榈酸酯颗粒由重庆西南合成制药股份有限公司研制生产，商品名“可尔生”，在临床上应用较广泛，常用于治疗儿童上呼吸道和泌尿道感染等。本文考察了盐酸克林霉素棕榈酸酯颗粒含量的HPLC测定方法，为制剂的质量控制提供了方法学依据。

1 仪器与材料

LC-10ATvp高效液相色谱仪（日本岛津公司）；克林霉素棕榈酸酯对照品（购自上海紫爵贸易有限公司，经精制后色谱峰为单峰）；盐酸克林霉素棕榈酸酯颗粒（可尔生）购自重庆西南合成制药股份有限公司（批号070504，规格为含克林霉素37.5mg）；甲醇为色谱纯；其它试剂为分析纯。

2 含量测定 2.1 色谱条件

参照文献[2-3],选定试验条件为：色谱柱为phenomenex-C18 (4.6mm×250mm，5µm)；流动相为甲醇:水:冰乙酸=172:27:1；检测波长为280nm；流速为2.0mL/min；进样量10μL。 2.2 对照品溶液的制备

称取在60°C减压干燥16h的对照品适量，精密称定，置50.0mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为3.20mg/mL的盐酸克林霉素棕榈酸酯对照品溶液，备用。 2.3 供试品溶液的制备

取本品10袋，合并内容物，混匀，取混合物适量，精密称定，加水溶解制成每1mL中约含0.5mg（以克林霉素计算）的溶液。精密量取5mL，置具塞离心试管中，精密加入氯仿5mL，加入碳酸钠溶液（30→100）1mL，用力振摇具塞离心试管15min，离心10min（转速为2500 r/min），弃去水层，取氯仿层3mL，用无水碳酸钠1g干燥。离心，精密量取氯仿液1mL于干燥的小试管中，通氮气蒸干。精密加入流动相1mL使残留物溶解，作为供试品溶液。 2.4 系统适应性试验

精密吸取流动相、“2.2”、“2.3”项下溶液适量，分别按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱，详见图1。

[1]

由图1可知，与克林霉素棕榈酸酯对照品比较，供试品克林霉素棕榈酸酯色谱峰分离良好，符合高效液相色谱法的要求。

A

B

C

图1 流动相（A）、对照品（B）和供试品（C）色谱图

Fig. 1 Chromatograms of Mobile phase (A), standard (B) and sample (C) of Clindamycin palmitate 2.5 最低检测限和最低定量限

取克林霉素棕榈酸酯对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成供试液，按上述色谱条件取10µL进样。经试验，当进样浓度为3.8μg/mL时，信噪比为3:1，即最低检测限为3.8μg/mL×10μL=38ng；当进样浓度为13.5μg/mL时，信噪比为10:1，即最低定量限为13.5μg/mL×10μL=135ng。

2.6 线性范围考察

取对照品储备液，分别精密吸取0.5、1、2、4、10 mL，置10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得浓度依次为0.16、0.32、0.64、1.28、3.20mg/mL的系列标准溶液。照上述色谱

条件，进样10μl，记录色谱图，以样品浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程为：

A =94411.2c+305345, r = 0. 9992，线性范围为0.16～3.20mg/mL。 2.7 精密度试验

分别取0.16、0.64、3.20mg/mL三种系列浓度的对照品溶液，于1d内分别进样5次及5d内分别进样5次；由标准曲线回归方程分别计算日内、日间相对标准偏差。结果见表1。

表1 精密度试验结果 Table 1 Results of precision test

浓度（mg·mL-1）

0.16 0.64 3.20

日内RSD（％，n＝5）

1.27 1.42 1.02

日间RSD（％，n＝5）

1.35 1.14 1.22

2.8 样品溶液稳定性试验

取070504批样品，按2.3项下方法制备供试品溶液，室温放置，在12h内每隔3h进样测定1次，测得供试品溶液中克林霉素棕榈酸酯的浓度RSD为1.46%，结果表明在12h内样品溶液稳定性较好。

2.9 重复性试验

取070504批样品，按2.3项下方法平行制备5份供试品溶液，分别进样，测得浓度RSD为1.29%，表明该法重复性较好。 2.10 回收率试验

取克林霉素棕榈酸酯对照品约16mg、20mg和24mg各三份，精密称定，按处方比例100%，加入辅料适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定含量，计算回收率，结果详见表2。

表2 回收率试验结果

Table 2 Results of recovery test

80%

加入量（mg）

17.85 17.22 17.68 20.36

100%

19.98 20.40 24.76

120%

25.42 25.18

测得量（mg）

17.68 17.38 17.98 20.59 20.15 20.58 24.56 25.86 24.96

回收率（%）

99.0 100.9 101.7 101.1 100.9 100.9 99.2 101.7 99.1

100.5

1.09

平均值(%)

RSD%

3 含量测定

取批号为070504样品，按 2.3项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算含量，样品含量测定结果为103.02%。

4 讨论

盐酸克林霉素棕榈酸酯颗粒国家标准中的含量测定方法采用十八烷基键合硅胶为填充剂；气

[4-5]

溶胶-醋酸铵-醋酸-水-甲醇（1∶0.77∶1∶20∶480）为流动相；检测器为折光检测器，流动相

[3]

较复杂，仪器要求较高。本作者采用美国药典25版中的高效液相含量测定方法，采用三元流动

相和紫外检测器，降低了对试剂和仪器的要求，可以在广大实验室中推广使用。

流动相采用等度洗脱系统，用二极管阵列检测器测定克林霉素棕榈酸酯对照品的峰纯度大于99.8%，表明主峰为单一峰，在210～400nm波长扫描，未露检杂质峰。

本方法灵敏度高、方法准确、重复性好。克林霉素棕榈酸酯浓度在0.16～3.20mg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系，且操作简单。 参考文献

[1] 可尔生（盐酸克林霉素棕榈酸酯颗粒）药品说明书. 重庆西南合成制药股份有限公司起草

[2] 薛玉英, 骆快燕, 徐斌等. 盐酸克林霉素棕榈酸酯干糖浆的研制[J], 药物生物技术, 1999, 6(2): 114-116. [3] 美国药典29版, 538.

[4] 盐酸克林霉素棕榈酸酯颗粒国家标准WS-491（X-422）-95. [5] 盐酸克林霉素棕榈酸酯国家标准WS-490（X-421）-95.