维普资讯 http://www.cqvip.com 第２０卷第２期 环境监测管理与技术 ２００８年４月 高效液相色谱法同时测定海水中孔雀石绿和无色孔雀石绿 桂英爱，王洪军，马琳，刘春林，王丹 （大连市海洋与渔业环境监测中心，辽宁 大连１１６０２３） 摘要：建立了高效液相色谱同时测定海水中孔雀石绿和无色孔雀石绿的方法。方法在０ ｍｇ／Ｌ一４．０ ｍｇ／Ｌ范围内线 性良好，孔雀石绿和无色孔雀石绿的最低检出限为０、０２ ｇ／Ｌ，平均加标回收率为８８．２％一１０４％，ＲＳＤ为３．２％一８．７％。 关键词：孔雀石绿；无色孔雀石绿；高效液相色谱法；海水 中图分类号：０６５７．７ ２ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００６—２００９（２００８）０２—００４４—０２ 孔雀石绿为翠绿色有光泽的结晶体，属三苯甲 ４．６ ｍｍ），北京振翔公司。检测器波长５８８ ｎｍ；流 烷类染料。由于其在控制真菌侵袭和寄生虫感染 动相：Ｖ（０．１ ｍｏｌ／Ｌ乙酸铵）：Ｖ（乙腈）＝１：４；柱温 等方面的显著效果，在水产养殖中得到了广泛应 ２５℃；流量１．５ ｍＬ／ｍｉｎ；进样体积２０仙Ｌ。 用，生物体浸染这种染料后会迅速吸收并在体内代 １．３ 水样处理 谢成无色孔雀石绿。孔雀石绿和无色孔雀石绿具 取５００ ｍＬ海水样于分液漏斗中，加入 有高毒性、高残留和致畸、致癌、致突变等作用，已 ５０．０ ｍＬ乙腈与二氯甲烷混合溶液（体积比为１： 被许多国家列为不得检出的禁用药物。水产品中 １）、２ ｍＬ二甘醇，剧烈振荡２ ｍｉｎ，静置１ ｈ，分层后 孔雀石绿最常用的检测方法是高效液相色谱 取下层有机相至蒸发瓶中。再往分液漏斗中加入 法 和液质联用法 ，样品处理过程繁琐，检 ５０．０ ｍＬ乙腈与二氯甲烷混合溶液（体积比为１： 测周期长。目前，除了国外淡水中孔雀石绿的检测 １），振摇，静置约１０ ｍｉｎ，待其分层后收集下层液 方法外 ，还未见海水中孔雀石绿的检测方法报 体于同一蒸发瓶中。 道。今建立了海水中孔雀石绿和无色孔雀石绿的 将收集液装到旋转蒸发装置上，于３５℃一 高效液相色谱检测法，应用该方法测定典型养殖场 ４０℃水浴中减压浓缩至近干，用乙腈定容至 工厂化养殖水体，结果令人满意。 １．０ ｍＬ，用０．４５仙ｍ有机滤膜过滤。 准确吸取２０ Ｌ样品提取液和混合标准使用 １ 试验 液测定，同时取５００ ｍＬ干净海水按同样步骤操作， １．１ 主要仪器与试剂 作为样品空白。 ’ Ａｇｉｌｅｎｔ １１００型高效液相色谱仪，配紫外检测 器，美国Ａｇｉｌｅｎｔ公司；ＲＥ一２０００Ｂ型旋转蒸发器， ２结果与讨论 上海亚荣生化仪器厂。 ２．１ 线性关系 孔雀石绿和无色孔雀石绿标准品，纯度分别为 配制０ Ｉｎｇ／Ｌ、０．１ ｍｇ／Ｌ、０．２ Ｉｎｇ／Ｌ、０．５ ｍｇ／Ｌ、 ９７．２％和９７．０％，德国Ｄｒ公司；０．１ ｇ／Ｌ孔雀石绿 １．０ Ｉｎｇ／Ｌ、２．０ ｍｇ／Ｌ、４．０ ｍｇ／Ｌ孔雀石绿和无色孔 和无色孔雀石绿标准溶液：分别准确称取孔雀石绿 雀石绿混合标准溶液系列，按上述方法测定，以峰 和无色孔雀石绿标准品０．０１０ ０ ｇ，用乙腈溶解，定 面积对质量浓度作标准曲线，线性关系良好。孔雀 容至１００ ｍＬ，避光保存；二甘醇，分析纯，天津福晨 石绿回归方程为Ｙ＝４０．２５４ ３８５ ｌｘ＋１．９８６ ００２ ８， 化学试剂厂；二氯甲烷，分析纯，天津科密欧试剂公 相关系数ｒ＝０．９９９ ７２；无色孔雀石绿回归方程为Ｙ 司；乙腈，色谱纯，德国Ｍｅｒｋ公司；超纯水，用赛多 ：５９．７６９ １３７ ｌｘ＋７．６１８ １６１ ４，相关系数ｒ＝ 利斯超纯水装置制备。 ０．９９９ ９１。 １．２ 色谱条件 收稿８期：２００７—０３—０９：修订８期：２００７—１１—２９ ＺＯＲＢＡＸ ＳＢ—Ｃｌ８色谱柱（２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ× 作者简介：桂英爱（１９６７一），女，黑龙江佳木斯人，高级工程 ５仙ｍ）；配有二氧化铅的柱后氧化柱（３５ ｍｍ× 师，硕士，从事海洋与环境监测工作。 ——４４—— 维普资讯 http://www.cqvip.com 第２０卷第２期 桂英爱等．高效液相色谱法同时测定海水中孔雀石绿和无色孔雀石绿 ２００８年４月 ２．２最低检出限 ０．０２ ｇ／Ｌ。 按照方法规定的取样体积和定容体积，根据３ ２．３精密度与加标回收试验 倍信噪比，得孔雀石绿和无色孔雀石绿的检出限均 向海水样品中添加不同质量浓度的孔雀石绿 为０．０１ ｐ，ｇ。试验海水量为５００ ｍＬ，故该方法检测 和无色孔雀石绿混合标准溶液，作精密度与加标回 海水中孔雀石绿和无色孔雀石绿的最低检出限为 收试验，结果见表１。 表１精密度与加标回收试验结果（ｎ＝６） 试验中曾用乙腈提取加标水样中的孔雀石绿， 采用该方法测定大连市南部海域、普兰店市和 结果浓缩物颜色几乎透明无色，回收率极低。添加 瓦房店市室内工厂化养殖水体中的孔雀石绿和无 二氯甲烷后，浓缩物颜色变成浅绿色，回收率也大 色孔雀石绿，８份海水样均未检出。 大提高。加入二甘醇有助于水体分层。 ２．４ 色谱图 ３ 结论． ０．１ ｍｇ／Ｌ孔雀石绿和无色孔雀石绿混合标准 采用高效液相色谱法测定海水中的孔雀石绿 溶液和加标海水样的色谱峰见图１、图２。在 和无色孔雀石绿，样品前处理简单易行，精密度与 ５８８ ａｍ处，孔雀石绿约６．０ ｍｉｎ出峰。无色孔雀石 准确度均符合要求，可应用于水产品中孔雀石绿和 绿的最大吸收波长为２６７ Ｄ．ｍ，由于背景干扰严重， 无色孔雀石绿的检测，以及养殖过程中其使用情况 须在色谱柱中洗脱，再经柱后氧化柱，发生氧化还 的全面监控。 原反应后生成孔雀石绿，在约８．６ ｍｉｎ处出峰。两 ［参考文献］ 者保留时间一致，峰形尖锐、对称，附近无干扰峰。 ［１］ ＭＩＴＲＯＷＳＫＡ Ｋ，ＰＯＳＹＮＩＡＫ Ａ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｌａｃｈｉｔｅ ｇｒｅｅｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ，ｌｅｕｃｏｍａｌａｃｈｉｔｅ ｇｒｅｅｎ，ｉｎ ｆｉｓｈ ｍｕｓｃｌｅ ｂｙ ｌｉｑｕｉｄ １．２ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ［Ｊ］．Ｂｕｌｌ Ｖｅｔ Ｉｎｓｔ Ｐｕｌａｗｙ，２００４，４８：１７３—１７６． １ ０．８ 五０．４ ［２］ ＭＩＴＲＯＷＳＫＡ Ｋ，ＰＯＳＹＮＩＡＫ Ａ，ＺＭＵＤＺＫＩ Ｊ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｏ ｍａｌａｃｈｉｔｅ ｇｒｅｅｎ ａｎｄ ｌｅｕｃｏｍａｌａｃｈｉｔｅ ｇｒｅｅｎ ｉｎ ｃａｒｐ ｍｕｓｃｌｅ ｂｙ ｌｉｑｕｉｄ －０．４ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｉｔｈ ｖｉｓｉｂｌｅ ａｎｄ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊｏｕｒ－ ０ ２ ４ ６ ８ １０ 时间ｔ，ｒａｉｎ ｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．２００５（１０８９）：１８７—１９２． １——孔雀石绿（６．０８３ ｍｉｎ）；２一无色孔雀石绿（８．６５２ ｍ．ｍ】。 ［３］ ＳＣＨＥＲＰＥＮＩＳＳＥ Ｐ，ＡＬＤＥＲＴ Ａ，ＢＥＲＧＷＥＲＦＦ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｏｆ ｍａｌａｃｈｉｔｅ ｇｒｅｅｎ ｉｎ ｆｉｎｆｉｓｈ ｂｙ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ 图１ 孔雀石绿和无色孔雀石绿标准色谱峰 ｔａｎｄｅｍ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］．Ａｎａｌｙｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，２００５ （５２９）：１７３—１７７． ［４］ＶＡＬＬＥＡ Ｌ，Ｄ ＹＡＺＡ Ｃ，ＡＮＴＯＮＩＯ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｕｍ ｏｆ ｍａｌａｃｈｉｔｅ ｇｒｅｅｎ ａｎｄ ｌｅｕｃｏｍａｌａｃｈｉｔｅ ｇｒｅｅｎ ｉｎ ｓａｌｍｏｎ ｍｕｓｃｌｅ ｂｙ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ・ａｔｍｏｓｐｈｅｒｉｃ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｉｏｎｉｓａｔｉ・ ０ ２ ４ ６ ８ １０ ｏｎ・ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｏｒｍｅｔｒｙ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ，２００５ 时问ｔ，ｍｉｌｌ （１０６７）：１０１—１０５． １——孔雀石绿（６．０９８ ｍｉｎ）；２——无色孔雀石绿（８．６７９ ｍｉｎ）。 ｒ５］ ￣ＡＦＡＲＫ Ｉ，￣ＡＦＡＲＫＯＶＡ Ｍ．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｌｏｗ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ 图２加标海水样色谱峰 ｍａｌａｃｈｉｔｅ￣＇ｅｅｎ ａｎｄ ｃｒｙｓｔｌａ ｖｉｏｌｅｔ ｉｎ ｗａｔｅｒ［Ｊ］．Ｗａｔｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ２００２．３６：１９６—２００． ２．５样品测定 本栏目责任编辑姚朝英
