第二十卷镩六册 口腔护理用品工业 ２０１０年１２月 ０ＲＡＬ ＣＡＲＥ ＩＮＤＵＳＴＲＹ ４１ 紫杉醇生产工艺精选 李全 （昆明牙膏有限责任公司６５０２２１） 摘要：以云南红豆杉枝叶为原料，通过三次柱层析、二次重结晶，利用目前国际上 先进的加压柱层析设备，确定精确的工艺参数和条件，提取含量超过９９％的紫杉醇。 关键词：红豆杉 紫杉醇生产工艺 １紫杉醇产品介绍 空度：一０．０８～～０．０６ＭＰａ下可干燥除去。 产品纯度：紫杉醇含量Ｉ＞９９％。 １．１ 产品相关知识 １．２ 产品使用范围及用途 产品名称：红豆素Ｉ（紫杉醇）。 紫杉醇对药物难治性卵巢癌和转移性乳腺癌、 英文名：Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ。 非小细胞癌有显著疗效，对Ｂ１６黑色素瘤、Ｓ１８０肉 产品化学名：｛２ａＲ一［２ａｏｔ，４ｐ，４ａＢ，６１３，９ｏｔ（ ｐ 瘤及Ｐ３３８、Ｌ１２１０、ＩＩＬ６０、Ｐ１５３４白血病也有较好治 ￥，ｐｓ ），１ｌｏｔ，１２ｃｔ，１２ ｎｏｔ，１２ｂｏｔ］｝一（９ＣＩ），ｐ一苯 疗作用，对头颈部癌、食道癌也有一定疗效。此外， 甲酰胺）一Ｏｔ一羟基一６，１２ｂ一双（乙酰氧基）一２ｏｒ， 红豆杉植物中含有的二萜类紫杉烷化合物，如三尖 ３，４，４ｏｔ，５，６，９，１０，１１，１２，１２ｏｒ，１２ｂ一十二氢一４，１１ 杉磷碱、巴卡亭ＩＩＩ、１０一去乙酰巴卡亭ＩＩＩ、１一羟基 一二羟基一４ｏｔ，８，１３，１３一四甲基一５一氧代一７，１１ 巴卡亭Ｉ和１０一去乙酰一７一差向紫杉醇等，具有通 一甲撑一１Ｈ一环＋（３，４）苯（１，２ｂ）氧桥一９一脂基 经、利尿、抗癌症功能，主治肾炎、小便不利、糖尿病。 苯丙酮酸。 １．３产品作用机理 分子式：Ｃ４７Ｈ５１ＮＯ１４。 紫杉醇具有独特的作用机理，可稳定微管，防止 分子量：８５３．９。 微管解聚，抑制细胞的有机分裂，从而抑制癌细胞的 化学结构式： 分裂繁殖。由于紫杉醇独特的抗癌机理，引起了全 Ａｃ０ ０ ＯＨ 世界医药界的特别关注，成为继阿霉素及顺铂后最 Ｆ１１ＰｈＣＯＮＨ ０１－￣ＵＩ＇ＩＦＩ Ｕ 重要的最热销的具有广谱性的抗癌新药，目前已在 几十个国家上市。 ＇ＯＨ １．４产品来源 紫杉醇为红豆杉属（又名：紫杉属，Ｔａｘｕｓ）植物 其他名称：Ｔａｘｏｌ或ＴａｘｏｌＡ。 的树皮及枝叶中分离得到的紫杉烷类化合物之一。 美国化学文摘号：［３３０６９—６２—４］。 我国是红豆杉属植物资源最丰富的国家，有云南红 化学分类：二萜类紫杉烷。 豆杉、中国红豆杉、东北红豆杉及西藏红豆杉４种和 性状：外观近白色粉末。 南方红豆杉１个变种。云南红豆杉资源分布在云南 熔点：２０８～２１０ｏＣ。 的西部、西北部、东北部和东南部，全省有红豆杉乔 比旋度：［ ］。加：一４９。～一５４。。 木近５００万株，目前已通过建立合法的原料种植基 紫外最大吸收波长：２２７ｎｍ。 地，保证紫杉醇的生产能力和市场需求。 鉴别：红外吸收光谱、紫外吸收光谱、核磁共振 波谱、质谱。 ２紫杉醇的生产工艺 溶解度：可溶于氯仿、乙醇、甲醇及丙酮，不溶于 ２．１ 工艺概述 水。 紫杉醇的生产主要是通过三次柱层析、二次重 吸湿性：紫杉醇具有一定的吸湿性，在室温空气 结晶来完成的。 中能够快速吸湿至饱和，所吸湿水分在５～４５℃，真 三次柱层析分别为：粗料柱层析一ｌ、半成品柱 ４２ 李全：紫杉醇生产工艺精选 ２０１０年第６期 层析一２、成品柱层析一３。 二次重结晶分别为：半成品重结晶和成品重结 晶。 柱层析的原理：基于吸附剂对分离物质的吸附 能力不同，在一定的洗脱条件下，通过反复的吸附作 用使得各组分因移动速度的不同而分别富集和分 离。 重结晶原理：利用混合物中各组分在某种溶剂 中溶解度不同，并且随温度的升降或加入不同的溶 剂而改变各组分溶解度，从而使其相互分离。 层析过柱：利用混合物在溶剂中的溶解度和吸 附（硅胶）的吸附力不同，当溶剂沿一定方向流经吸 附剂时，混合物各组分由于反复溶解与吸附，即形成 在此方向相对不同的运动速度，达到分离的效果。 极性：某物质中电子云密度不均的程度称为极 性，分布越不均匀极性越大。极性是物质重要的物 理化学性质，对该物质在某溶剂中溶解度的大小影 响很大。是层析过柱的理论依据之一。 薄层层析：（ＴＬＣ）俗称点板、跑板过程。原理与 层析柱相同，溶剂运动的动力为薄层（硅胶与煅石 膏混合涂层）中细小空隙形成毛细管而对溶剂产生 的向上的牵引力。通过展开、显色判断层析柱的过 柱情况。 ２．２工艺流程图 ２．２．１生产工艺流程总图１ 半成 ２．２．２生产工艺流程总图２ ２．２．３ 主要物料生产工艺流程总图 ２．２．４装柱生产工艺流程图 ２０１０年第６期 李全：紫杉醇生产工艺精选 ４３ ２．２．７浓缩、回收生产工艺流程图１ 孽艚霪 一３ ７ ８ ２．２．５ １一柱层析生产工艺流程图 粗料柱—————．．叫 Ｅ柱 ：：： 篓 芋 氯甲烷 浓缩回收区．ｆ ３触，Ｐ￣Ａ ’５ 麓 置 三氯甲烷：异丙醇＝１０００：ｔＯ Ｏ５（重量比） 浓缩回收区 浓缩回收区 浓缩回收区 ２．２．６ ２一柱层析生产工艺流程图 卜∞柱———叶［Ｌ — 石油醚：二雪三］石油醚： ￣／＝１ｏｏｏ ：。３７。０（重量比） 一收胁 …卿 层析（２） ｌ ＴＬＣ判断出现紫杉醇物质点 ２经５Ｏ小时层析，无物质点出现 浓缩回收 ｛由壁 丙酮＝加ｏｏ：４７７（重量比） 浓缩回收 浓缩回收区 浓缩回收区 浓缩回收匡 既无物质点改加再 冬件（ＶＬｑ判断）： 、也无杂质点。 丙酮 洗柱液 浓缩回收 洗柱液 【 柱残留 ２．２．８浓缩、回收生产工艺流程图２ ２ Ｂｎ ２．・ ２．・ ９干月半成品生产工艺流程图 虬口 生厂上乙 ￡翟 ２一Ｄ３ａ（５％－－１５％）、２－Ｄ３ｂ（大于等于１５％） 李全：紫杉醇生产工艺精选 ２０１０年第６期 ２．２．１０加压层析柱生产工艺流程图１ 洗柱液 ＝ｌｇ：２—４ｍｌ ±１．５）ｋｇ 设置：压力小于ｌＯｂａｒ 流量：（１００－＋４０１ １／ｈ ｆ上样 设置：压力小于ｌＯｂａｒ 流量：４５１／ｈ ｌ 层析 ２．２．１１加压层析生产工艺流程图２ ２．１．１２柱层析洗脱液调配工艺流程图 Ｉ ｌ 二次柱层析 二次柱层析 接到生产任务通知单，核对原料量（装柱数Ｘ ３ 生产操作过程及参数控制 ２．５—３．Ｏｋｇ干基／柱），按下达任务领取原料并计算 ３．１ 一次柱层析生产操作过程 拌料数据，填写拌料配方单，办理交接手续，拌料料 ３．１．１拌料数据计算 胶比为１：１．６～２．３（目标参数１：２．０）。 ２０１０年第６期 李全：紫杉醇生产工艺精选 ４５ ３．１．２拌料 批产品生产结束后，填写请验单交至检测室，取样检 测后发放检验报告。接到检验报告单后，计算得率， 完成批记录并审核。检验结果符合质量标准，批记 接到拌料配方单，每机每次称取含量Ｉ＞０．８％的 ６—２５ｋｇ原料，加入氯仿，搅拌２０ｍｉｎ以上至物料呈 流体状。称取硅胶，在搅拌机中充分搅拌３０ｒａｉｎ以 上至混合均匀（颜色均一；无大于１０ｒａｍ团块）。 ３．１．３干燥及过筛 将混合均匀的料胶置于已编好号的晾料盘中 录经审核合格后，发放合格证，其中１一Ｄ３合格品 进入下一工序。 ２．２二次柱层析生产操作过程 ２．２．１拌料数据计算 接到生产任务通知单，核对１一Ｄ３量（装柱数 （料面平整、松散，厚度￣＜４０ｍｍ），放入干燥房内，于 室温、抽风的条件下干燥２４～４８小时后，过４０目 ×１．２ １．３ｋｇ干基／柱），按下达任务领取１一Ｄ３并 筛，称重。要求干燥度＝干燥后料胶量／干燥前（物 计算拌料数据，填写拌料配方单，办理交接手续，拌 料干基＋硅胶）量＝０．９～１．Ｉ；干基料胶比＝（干燥 料料胶比为１：（１．２～１．５）（目标参数Ｉ：１．３）。 后料胶量一加入净硅胶量）／干燥后料胶量＝０．２３ ２．２．２拌料 ～０．４４。 接到拌料配方单，每机每次称取含量２３％的１ ３．１．４小试 一Ｄ３干基５～３０ｋｇ，再称取适量硅胶，在搅拌机中 取干燥后的料胶，模拟１次柱层析的装柱比例， 充分搅拌３０ｍｉｎ以上至混合均匀（颜色均一；无大 进行装柱前小试。要求：小试流速￣４ｍｌ／ｍｉｎ。 于１０ｒａｍ团块）。 ３．１．５装柱数据计算 ２．２．３干燥及过筛 小试合格后，计算装柱数据，要求每柱干基量： 将混合均匀的料胶置于已编好号的晾料盘中， 每柱总硅胶量（１：３．７±０．５）。目标参数１：３．７。 （料面平整、松散，厚度￣＜４０ｍｍ）。放人干燥房内， 填写装柱配方单，并办理交接手续。 于室温、抽风的条件下干燥２４～４８小时后，过４０目 ３．１．６装柱及上柱 筛，称重。、要求干燥度＝干燥后料胶量／于燥前（物 按装柱配方单装柱，柱子装好后拖至生产区安 料干基＋硅胶）量＝０．９～１．１；干基料胶比＝（干燥 装，办理交接手续。 后料胶量一加入净硅胶量）／干燥后料胶量＝０．４０ ３．１．７柱层析 —０．４４。 各班组办理好交接手续后，层析区主班检查柱 ２．２．４装柱数据计算 子所用洗脱液１一ＡＩ、１一Ａ２的储量及极性（极性：１ 干燥度和干基料胶比检查合格后，计算装柱数 一Ａ１ Ｒｆ＝０；１一Ａ２ Ｒｆ＝０．２３±０．０１）。检查完毕 据，要求每柱干基量：每柱总硅胶量（１：７．８±０．２）。 后开始加ｌ—Ａ１液，进行柱层析分离。柱子开始滴 目标参数１：７．８～。填写装柱配方单，办理交接手续。 液后，每隔２小时至少进行１次物质ＴＬＣ检查。在 ２．２．５装柱及上柱 满足层析改极条件时，即改加１一Ａ２。根据物质 按装柱配方单装柱，柱子装好后拖至生产区安 ＴＬＣ检查结果，将洗出液分为１一Ｂ１、１一Ｂ２、１一Ｂ３、 装，办理交接手续。 １一Ｂ４共４类。层析过程中，开启相应加、放液电磁 ２．２．６柱层析 阀加液或放液，洗出液随管道放至浓缩回收区对应 各班组办理好交接手续后，层析区主班检查柱 各１一Ｂ类罐贮存。１一Ｂ４经ＴＬＣ检测无物质点后 子所用洗脱液２一Ａ１、２一Ａ２的储量及极性（极性：２ 即停柱，停柱５—８小时后通知拆柱。 一Ａ１ Ｒｆ＝０．１８±０．０１；２一Ａ２ Ｒｆ＝０．２８±０．Ｏ１）。 ３．１．８拆柱 检查完毕后开始加２一Ａ１液，进行柱层析分离。柱 接到拆柱通知后，进行拆柱。 子开始滴液后，每隔２小时至少进行１次物质ＴＬＣ ３．１．９浓缩回收 检查，在满足层析改极条件时，即改加２一Ａ２。根据 对放入浓缩回收区的１一Ｂ类罐中溶液经ＴＬＣ 物质ＴＬＣ检查结果，将洗出液分为２一Ｂ１、２一Ｂ２、２ 检查，符合判板规则抽至相应真空浓缩锅中。在５０ 一Ｂ３ａ、２一Ｂ３ｂ共４类。层析过程中，开启相应加、 ～６５℃常压下浓缩，浓缩后得到１一Ｄ１、１一Ｄ２、１一 放液电磁阀加液或放液，洗出液随管道放至浓缩回 Ｄ３、１～Ｉ）４及ｌ—Ｃ１、１一Ｃ２两种回收液。１一Ｃ１、１ 收区对应各２一Ｂ类罐贮存。层析后期２一Ｂ２经 一Ｃ２经检查合格后，磁力泵打至对应１一Ａ配液罐 ＴＬＣ检测无物质点后即停柱，停柱５～８小时后通知 中配液。Ｄ类浓缩物各装在２５Ｌ或５０Ｌ加仑桶。该 Ｉ区拆柱。 李全：紫杉醇生产工艺精选 ２０１０年第６期 ２．２．７拆柱 时取出搅拌、碾细并称重（恒重误差≤５％。）。干燥 接到拆柱通知后，进行拆柱。 ２．２．８浓缩回收 ’ 至间隔２４小时之间称重的重量误差≤５％。时．开始 每２小时称１次重量，连续称４次并计算重量误差， ４次的重量误差均≤５％ｏ时，计算重量误差平均值， 即为恒重误差。 对放入浓缩回收区的２一Ｂ类罐中溶液经ＴＬＣ 检查，符合要求抽至相应真空浓缩锅中。在４０～ ７５ｃ【＝常压下浓缩，浓缩后得洗柱液浓缩物２一Ｄ１、２ 一２．３．５检测：干燥后的半成品及副产物，取样、 Ｄ２、２一Ｄ３ｂ、２一Ｄ３ａ及２一Ｃ１、２一Ｃ２两种不同 检测并发放检验报告。接到检验报告单后，计算得 率，填写完成批生产记录并审核。检验结果符合质 极性的回收溶剂。２一Ｃ１、２一Ｃ２经检查合格后，磁 力泵打至对应２一Ａ配液罐中配液。Ｄ类浓缩物各 装在２５Ｌ或５０Ｌ加仑桶。该批产品生产结束后送中 间体待验区。填写请验单交至检测室，取样检测后 发放检验报告。接到检验报告单后，计算得率，完成 批记录并审核。检验结果符合质量标准，批记录经 审核合格后，发放合格证，其中２一Ｄ３合格品进入 下一工序。 ２．３ 半成品生产操作过程（常压） ２．３．１ ２一Ｄ３的领取：接到生产任务通知单 后，从中间体库领取２一Ｄ３。２一Ｄ３干基紫杉醇百 分含量为：２一Ｄ３ａ：５—１５％；２一Ｄ３ｂ：≥１５％。 ２．３．２重结晶：２一Ｄ３经过浓缩、重结晶、抽滤 后得到的固形物用丙酮、石油醚反复溶解、重结晶， 过程中反复进行ＴＬＣ检测，直至得到灰白色固形 物。重结晶过程中得到的母液，经ＴＬＣ检测板图一 致的合并，送浓缩工序，浓缩至一定浓度加石油醚重 结晶；重结晶过程中得到的固形物反复溶解、重结， 直至得到经ＴＬＣ检测板图与半成品板图一致的灰 白色固形物。在重结晶过程中得到的不能再重结的 母液浓缩送检后放置。在重结晶过程中几次得到的 灰白色固形物经ＴＬＣ检测以紫杉醇点为主，相关物 质主要是三尖杉磷碱或７一差向紫杉醇的投入下一 工序。浓缩过程重结晶回收液用于调配２一Ａ类 液。重结晶条件：时间２Ｏ分钟～４８小时；温度：室 温（５～３Ｏ℃）。浓缩条件：Ｔ：５０～６０ｏＣ；真空度为： 常压一１０ｍｂａｒ。 ２．３．３合并：将在重结晶过程中几次得到的灰 白色固形物经ＴＬＣ检测以紫杉醇点为主，杂质主要 是三尖杉磷碱或７一差向紫杉醇的合并在一起，用 丙酮溶解形成批次，并按规定给予半成品批号，在 ５０—６０℃；真空度＝常压一１０ｍｂａｒ下抽干。数次抽 干的半成品再洁净容器中用干净绵纸扎好口，贴号 标签，送干燥工序。回收液并入重结晶回收液。 ２．３．４干燥：半成品在Ｔ＝５～４５％；真空度＝ 一０．０８一一０．０６ＭＰａ；干燥厚度不超过１０ｅｍ的条件 下干燥４８～１２０小时，直至恒重。过程中每隔４小 量标准、批记录经审核合格后，发放合格证。 ２．３．６包装：检测合格的半成品，按生产指令 要求，５个工作日内不投入成品，封好盛放半成品的 容器，并按要求用塑料袋包扎好，放人装有干燥剂的 塑料袋中，封口，记录实际包装重量交给半成品库管 员，在室温下避光保存。 ２．４成品生产操作过程（常压） ２．４．１检查 接到装柱配方单后，柱层析区域当班主班检查 装好的柱子及调配好的洗脱液。要求：柱外表面清 洁、考克完好、柱硅胶均匀，化学硅胶：３．５～４ｋｇ／柱 （目标参数３。８ｋｇ）；洗脱液Ｒｆ值＝０．１（±５％）。 ２．４．２上柱 检查完毕，按料胶比１：３６～４０（目标参数１： ３８），计算并称取半成品９５～１０５ｇ／柱，加入二氯甲烷 ４００～１０００ｍｌ，加热Ｔ＝４０～５０℃溶解后上柱。用二 氯甲烷清洗容器４～５次，待料液吸干后把清洗液加 入柱中。 ２．４．３柱层析 待清洗液吸干后，加入洗脱液，并保持洗脱液面 始终高于硅胶面２～３ｅｍ，洗出液每１０００～２０００ｍｌ 进行一次ＴＬＣ检测。根据ＴＬＣ结果将洗出液分为３ 一Ｂ１、３一Ｂ２、３一Ｂ２ａ、３一Ｂ３、３一Ｂ４送半成品生产 区浓缩。层析到洗出液ＴＬＣ判断以三尖杉磷碱为 主时，即３一Ｂ３段结束后，抽干柱液，加入丙酮洗 柱，洗出液为３一Ｂ４。３一Ｂ４经ＴＬＣ检测即无物质 也无杂质即停止洗柱。抽干残留洗柱液，然后拆柱。 ２．４．４浓缩 ３一Ｂ１、３一Ｂ２、３一Ｂ３ａ、３一Ｂ３、３一Ｂ４经浓缩得 到３一Ｄ１、３一Ｄ２、３一Ｄ２ａ、３一Ｄ３、３一Ｄ４共５类浓 缩物。３一Ｄ２、３一Ｄ２ａ、３一Ｄ３再在浓缩条件下抽 干，３一Ｄ２进入成品生产下一工序；３一Ｄ２ａ、３一Ｄ３ 经过重结晶处理得半成品，并按规定分别确定批号； ３一Ｄ１、３一Ｄ４不再处理，确定批号送检后放置。回 收液返回调配３一Ａ类液。 浓缩条件：Ｔ＝４０～７０ｏＣ；真空度常压～１０ｍｂａｒ。 ２０１０年第６期 李全：紫杉醇生产工艺精选 ４７ ３～Ｂ１、３一Ｂ２ａ、３一Ｂ３、３一Ｂ４的浓缩以及３一 复溶解、重结晶３—５次，直至得到灰白色固形物。 Ｄ２ａ、３一Ｄ３的重结晶处理均在半成品生产区完成。 重结晶过程中得到的母液，经ＴＬＣ检测板图一致的 ２．４．５ ３一Ｄ２重结晶 合并，送浓缩工序，浓缩至一定浓度加石油醚重结 抽干后的３一Ｄ２用丙酮、石油醚反复溶解、重 晶；重结晶过程中得到的固形物反复溶解、重结，直 结晶４～５次，直至得到近白色固形物。重结晶过程 至得到灰白色固形物。在重结晶过程中得到的不能 中得到的母液，经ＴＬＣ检测板图一致的合并，送浓 再重结的母液浓缩送检后放置。在重结晶过程中几 缩工序，浓缩至一定浓度加石油醚重结晶。重结晶 次得到的经ＴＬＣ检测确认以紫杉醇点为主，杂质主 过程中得到的固形物反复溶解、重结，直至得到经 要是三尖杉磷碱或７一差向紫杉醇的灰白色固形物 ＴＬＣ检测只有紫杉醇点的近白色固形物。重结晶过 合并在一起，用丙酮溶解形成批次，并按规定给予半 程中得到的不能再重结的母液浓缩送检后放置；重 成品批号，在Ｔ：５０～６０℃；真空度常压～１０ｍｂａｒ下 结晶过程中得到的经ＴＬＣ检测只有紫杉醇点的近 抽干。数次抽干的半成品在洁净容器中碾细后，再 白色固形物，投入下一工序。浓缩过程重结晶回收 全部装入蒸发球中在Ｔ＝４０～４５￣Ｃ，真空度保持在 液用于调配２一Ａ类液。 ５０ｍｂａｒ以下旋转抽干８—１６小时，取出后装入洁净 重结晶条件：时间２０分钟～４８小时；温度室温 的容器中用干净绵纸扎口，帖标签，送干燥工序。浓 （５—３０￣Ｃ）。 缩过程重结晶回收液用于调配２一Ａ类液。 浓缩条件：Ｔ＝５０～６Ｏ℃；真空度为常压～ 重结晶条件：时间２Ｏ分钟～４８小时；温度：室 １０ｍｂａｒ。 温（５～３０℃）。 ２．４．６合并、重结晶 浓缩条件：Ｔ＝５０～６０℃；真空度为常压～ 将在３一Ｄ２重结晶过程几次得到的经ＴＬＣ检 １０ｍｂａｒ。 测只有紫杉醇点、经过４～５次重结晶的固形物合 半成品干燥：在Ｔ：５～４５ｏＣ；真空度：一０．０８ 并，用丙酮溶解形成批次后，确定成品批号（批成品 ～一０．０６Ｍｐａ；干燥厚度不超过１０ｃｍ的条件下干燥 定义：在同一容器中重结晶，并在同一设备内进行最 ４８—１２０小时，直至恒重，过程中每４小时取出搅 后干燥的成品，为一个批成品）。加入石油醚，使其 拌、碾磨并称重（恒重误差≤５‰）。干燥至间隔２４ 充分结晶２小时以上，然后抽滤，得到的成品移人贴 小时之间称重的重量误差≤５‰时，开始每２小称一 好标签的洁净容器中碾细，进入下一工序。抽滤得 次重量，连续称４次并计算重量误差，４次的重量误 到的母液在成品生产厂房Ｔ＝５０～６０ｃｃ；真空度＝ 差均≤５％ 时，计算重量误差的平均值，即为恒重误 常压一１０ｍｂａｒ下抽干。然后再按成品干燥条件下 差。 干燥后送去检测，并单独放置。 ２．４．９检测 ２．４．７干燥 干燥后的成品、半成品及其它副产物由部门质 ①旋转干燥：将碾细的成品移人大旋转蒸发球 量管理员填写请验单，交质检部取样、检测并发放检 中，在旋转蒸发仪上用真空泵真空干燥２４小时。干 验报告。部门质量管理员接到检验报告单后，计算 燥条件为：Ｔ：４０～４５℃，真空度保持在５０ｍｂａｒ以 利率，填写完成批生产记录并交质监部审核。检验 下，转速为２０转／ｍｉｎ左右。 结果符合质量标准、批生产记录经质监部审核合格 ②干燥箱干燥：旋转干燥２４小时后的成品，移 后，由质监部发放合格证，成品进入包装工序。任何 人洁净的容器中，在Ｔ：５—４５＂１２，真空度＝一０．０８ 项目不合格，按不合格品处理程序处理。 ～一０．０６Ｍｐａ，干燥厚度≤１０ｅｒａ的条件下干燥至 ２．４．１０半成品的包装 ６０～１２０小时（包括旋转干燥的时间在内）。过程中 检测合格的半成品，按生产指令要求，在两周内 每隔４小时取出搅动一次，并称重，干燥至恒重（恒 进入成品生产的，放于玻璃干燥器中避光保存；两周 重误差≤５％。）。干燥至间隔２４小时之间称重的重 内不进人成品生产的半成品，以５００ｇ／瓶规格包装， 量误差≤５‰时，开始每２小时称一次重量，连续称 同一批次不足５００ｇ的部分单独包装，记录实际包装 ４次并计算重量误差，４次的重量误差均≤５％一时，计 重量、贴好标签后，放人装有干燥剂的塑料袋中，封 算重量误差的平均值，即为恒重误差。 口，在室温下避光保存。 ２．４．８ ３一Ｄ２ａ、３一Ｄ３重结晶 ２．４．１ｌ包装、入库 抽干后的３一Ｄ２ａ（或３一Ｄ３）用丙酮、石油醚反 接到成品合格证及包装指令，领取包装材料及 ４８ 李全：紫杉醇生产工艺精选 ２０１０年第６期 标签。包装前先检查包装材料、标签是否合格，数量 ⑤柱层析 和规格是否与包装指令要求一致，检查无误后按包 启动Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ系统和紫外检测器，洗脱液在 装指令包装。包装结束后，必须对包装场所进行清 ８５Ｌ／ｈｒ附近恒流洗脱，洗脱液Ｒｆ值＝０．１（±５％）， 场，保证包装场所的清洁和整齐。将成品置于Ｔ＝５ 每５～ｌ０升进行一次ＴＬＣ检测，根据紫外检测并辅 ～３０℃；真空度一０．０８～一０．０６Ｍｐａ下干燥２４小 以ＴＬＣ板图将洗出液分为３一Ｂ１、３一Ｂ２ａ、３一Ｂ３及 时，取出封口并贴好标签。成品批包装记录经质监 ３一Ｂ４。当ＴＬＣ板图上紫杉醇点淡、三尖杉磷碱点 部审核通过后，填写成品入库单，办理入库手续。 浓时，改用高极性的洗脱液洗柱（至少４个柱体 质监部质量检查员必须对包装过程和已包装产 积），洗柱液的Ｒｆ值＝０．９—１．０，流速设置为（１００ 品进行监控、检查。 ±４０）Ｌ／ｈｒ，直至ＴＬＣ板图上无任何物质时，停止洗 ２．５ 半成品生产操作过程（加压层析生产） 柱。其中３～Ｂ２ａ及３一Ｂ３为半成品洗出液，送半 ２．５．１柱层析前准备 成品生产下一工序浓缩处理。 ①装柱 ⑥浓缩 称取薄层层析硅胶Ｈ（２３ ４－１．５）ｋｇ，以薄层层 ３一Ｂｌ、３一Ｂ２ａ、３一Ｂ３、３一Ｂ４经浓缩得到的３ 析硅胶Ｈ：洗柱液＝１ｇ：２—４ｍｌ加入洗柱液，搅拌均 一Ｄｌ、３一Ｄ２ａ、３一Ｄ３、３一Ｄ４四类浓缩物。每批同 匀，湿法装填Ｆｉｎｅｌｉｎｅ３５０柱，将装填好的柱子接上 类浓缩物合并后统一处理。３一Ｄ２ａ及３一Ｄ３再在 Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ系统，用二氯甲烷压柱，压力小于ｌＯｂａｒ， 浓缩条件下抽干，经过重结晶处理得半成品，并按规 流速（Ｍａｎｆｌｏｗ）（２０ －４１５）％； 定分别确定批号；３一Ｄ１及３一Ｄ４不再处理，确定 ②Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ系统检查、参数设置及柱平衡 批号送检后放置。回收液返回调配３一Ａ类液。浓 上样前需对系统的流速检测器、紫外检测器、隔 缩条件：Ｔ＝４０～７０℃；真空度常压～１０ｍｂａｒ。 膜泵及系统运行及柱子与系统连接、系统设置及 ⑦３一Ｄ２ａ及３一Ｄ３重结晶 Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ主系统运行情况进行检查。确定系统可 抽干后的３一Ｄ２ａ（或３一Ｄ３）用丙酮、石油醚反 以正常运行后设置参数：层析压力≤ｌＯｂａｒ；紫外检 复溶解、重结晶３～５次，直至得到灰白色固形物。 测波长：２５４ｎｍ。在流速（Ｆｌｏｗ）：（１００±４０）Ｌ／ｈｒ 重结晶过程中得到的母液，经ＴＬＣ检测板图一致的 下，用二氯甲烷平衡柱子１—２个柱体积，若硅胶重 合并，送浓缩工序，浓缩至一定浓度加石油醚重结 复使用，需用３一Ｃ平衡柱子２—４个柱体积后，改用 晶；重结晶过程中得到的固形物反复溶解、重结，直 新鲜二氯甲烷或二氯甲烷平衡液再次重蒸后再平衡 至得到灰白色固形物。在重结晶过程中得到的不能 １—２个柱体积，直至紫外检测线降至基线且平稳。 再重结的母液浓缩送检后放置。在重结晶过程中几 注：一个柱体积＝４８Ｌ。 次得到的经ＴＬＣ检测确认以紫杉醇点为主，杂质主 ③溶样 要是三尖杉磷碱或７一差向紫杉醇的灰白色固形物 按料：胶：１：２５～３８（目标值＝１：３１）计算并 合并在一起，用丙酮溶解形成批次，并按规定给予半 称取合格的固形物［每次上样量为（８００－Ｉ－１５０）ｇ］， 成品批号，在Ｔ＝５０—６０ｃ（＝；真空度常压一１０ｍｂａｒ下 按固形物：二氯甲烷＝ｌｇ：３—６ｍｌ量取二氯甲烷，在 抽干。数次抽干的半成品在洁净容器中碾细后，再 水浴锅上将固形物完全溶解，溶解温度为４０— 全部装入蒸发球中在Ｔ＝４０—４５￣Ｃ，真空度保持在 ５０￣Ｃ，过滤，将滤液放置备用。 ５０ｍｂａｒ以下旋转抽干８～１６小时，取出后装入洁净 ④上样 的容器中用干净绵纸扎好口，贴好标签，送干燥工 取一份固形物溶解液，通过Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ系统进 序。浓缩过程重结晶回收液用于调配２一Ａ类液。 样，系统设置为： 重结晶条件：时间２Ｏ分钟～４８小时；温度为室 Ｏｔｈｅｒ：Ｒｅｃｏｒｄ ｏｎ 温（５～３０ｏＣ）。 Ｉｎｌｅｔ：Ｓａｍｐｌｅ 浓缩条件：Ｔ＝５０～６０℃；真空度＝常压～ Ｂｕｂｂｌｅ Ｔｒａｐ：ｂｙｐａｓｓ １０ｍｂａｒ。 Ｃｏｌｕｍｎ：Ｄｏｗｎｆｌｏｗ 半成品干燥条件：在Ｔ＝５—４５℃；真空度＝一 Ｏｕｔｌｅｔ：Ｗａｓｔｅ ０．０８～一０．０６Ｍｐａ；干燥厚度不超过ｌＯｃｍ的条件下 Ｆｌｏｗ：（１５—４５）Ｌ／ｈｒ 干燥４８～１２０小时，直至恒重，过程中每４小时取出 Ａｉｒ Ａｌａｒｍ：１５１ Ｄｉｓａｂｌｅｄ、１５２ Ｄｉｓａｂｌｅｄ 搅拌、碾磨并称重。（恒重误差≤５％。）。 ２０１０年第６期 李全：紫杉醇生产工艺精选 Ｃｏｌｕｍｎ：ｄｏｗｎｆｌｏｗ Ｏｕｔｌｅｔ：ｗａｓｔｅ ４９ ⑧检测 干燥后的半成品及其它副产物由部门质量管理 员填写请验单，交检测室取样、检测并发放检验报 告。部门质量管理员接到检验报告单后，计算得率， 填写完成批生产记录并交质监部审核。检验结果符 合质量标准，批生产记录审核合格后，由质检部发放 合格证。 检测合格的半成品，按生产指令要求，在两周内 Ｆｌｏｗ：（１５～４５）Ｌ／ｈｒ Ｗａｔｃｈ Ａｉｒ １５ｌ ③柱层析 启动Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ系统和紫外在线检测器，用洗 脱液在８５１Ｍｈ附近恒流洗脱，洗脱液Ｒｆ值＝０．１（± ５％），每５～１０升进行一次ＴＬＣ检测，根据紫外检 进入成品生产的，放于玻璃干燥器内避光保存；两周 测并辅以ＴＬＣ板图将洗出液分为３一Ｂ１、３一Ｂ２ａ、３ 内不进入成品生产的半成品，以５００ｇ／瓶规格包装， 一Ｂ２、３一Ｂ３、３一Ｂ４及平衡液。当ＴＬＣ板图上紫杉 同一批次不足５００ｇ的部分单独包装，记录实际包装 醇点淡、三尖杉点浓时，改用高极性的洗脱液洗柱， 重量、贴好标签后，放入装有干燥剂的塑料袋中，封 洗柱液的Ｒｆ值＝０．９～１．０，流速设置为：（１００７ ４０） 好口，在室温下避光保存。 Ｌ／ｈ，直至ＴＬＣ板图上无任何物质时（至少４个柱体 ２．６成品生产操作过程（加压层析生产） 积），停止洗柱。其中ＶＢ２为成品洗出液，送成品生 ２．６．１柱层析前准备 产下一工序浓缩处理。 ①装柱 ２．６．３浓缩 称取薄层层析硅胶Ｈ，以薄层层析硅胶Ｈ：洗柱 ３一Ｂ１、３一Ｂ２ａ、３一Ｂ２、３一Ｂ３、３一Ｂ４、平衡液经 液＝１ｇ：２～４ｍｌ加入洗柱液，搅拌均匀，湿法装填 浓缩得到的３一Ｄ１、３一Ｄ２ａ、３一Ｄ２、３一Ｄ３、３一Ｄ４ Ｆｉｎｅｌｉｎｅ３５０柱，将装填好的柱子接上Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ系 （３一Ｂ４及平衡液浓缩物均归为３一Ｄ４）五类浓缩 统，用二氯甲烷压柱，压力≤ｌＯｂａｒ，流量（Ｍａｎｆｌｏｗ） 物。每批同类浓缩物合并后统一处理。３一Ｄ２、３一 （２０±１５）％； Ｄ２ａ及３一Ｄ３再在浓缩条件下抽干，３一Ｄ２进人成 ②溶样 品生产下一工序；３一Ｄ２ａ、３一Ｄ３经过重结晶处理 按料：胶＝１：３６～４０（目标值＝１：３８）计算并 得半成品，并按规定分别确定批号；３一Ｄｌ及３一Ｄ４ 称取合格半成品［每次上样量为（６００ ４－５０）ｇ］，按半 不再处理，确定批号并送检后放置。回收液返回调 成品：二氯甲烷＝１ｇ：３—６ｍｌ量取二氯甲烷，在水浴 配３一Ａ类液。浓缩条件：Ｔ：３０～７０￣Ｃ；真空度：常 锅上将半成品完全溶解，溶解温度为４０—５０％，过 压～１０ｍｂａｒ。 滤，放置备用。 ３一ＢＩ、３一Ｂ２ａ、３一Ｂ３、３一Ｂ４、平衡液的浓缩以 ２．６．２加压柱层析 及３一Ｄ２ａ及３一Ｄ３的重结晶处理在半成品生产区 ①Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ系统检查、参数设置及柱平衡 完成。 上样前需对系统的流量检测器、紫外检测器、隔 ２．６．４ ３一Ｄ２重结晶 膜泵及系统运行及柱子与系统连接、系统设置及 抽干后的３一Ｄ２用丙酮、石油醚反复溶解、重 Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ主系统运行情况进行检查。确定系统可 结晶４～５次，直至得到近白色固形物。重结晶过程 以正常运行后设置参数：层析压力≤ｌＯｂａｒ；紫外检 中得到的母液，经ＴＬＣ检测板图一致的合并，送浓 测波长：２５４ｎｍ。在流量（Ｆｌｏｗ）：（１００７ ４０）Ｌ／ｈｒ 缩工序，浓缩至一定浓度加石油醚重结晶；重结晶过 下，用二氯甲烷平衡柱子ｉ～２个柱体积，若硅胶重 程中得到的固形物反复溶解、重结，直至得到经ＴＬＣ 复使用，需用３一Ｃ平衡柱子２～４个柱体积后，改用 检测只有紫杉醇点的近白色固形物。重结晶过程中 新鲜二氯甲烷或二氯甲烷平衡液再次重蒸后再平衡 得到的经ＴＬＣ检测只有紫杉醇点的近白色固形物， １～２个柱体积，直至紫外降至基线且平稳。 投人下一工序。浓缩过程中重结晶回收液送ＶＩ区 注：一个柱体积＝４８Ｌ 调配ＩＶＡ类液。 ②上样 重结晶条件：时间２Ｏ分钟～４８小时；温度为室 取一份半成品溶解液，通过Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ系统进 温（５～３０℃）。 样，系统设置为： 浓缩条件：Ｔ＝５０～６０ｏＣ；真空度：常压～ Ｉｎｌｅｔ：ｓａｍｐｌｅ ｌＯｍｂａｒｏ ｂｕｂｂｌｅ Ｔｒａｐ：ｂｙｐａｓｓ ２．６．５合并、重结晶 ５０ 李全：紫杉醇生产工艺精选 ２０１０年第６期 将在３一Ｄ２重结晶过程几次得到的经ＴＩ ｃ检 测只有紫杉醇点、经过４～５次重结晶的固形物合 并，用丙酮溶解形成批次后，确定成品批号（批成品 定义：在同一容器中重结晶，并在同一设备内进行最 后干燥的成品，为一个批成品）。加入石油醚，使其 充分结晶２／ｂｕ，－ｔ以上，然后抽滤，得到的成品移人贴 好标签的一个洁净容器中碾细，进入下一工序。抽 滤得到的母液在成品生产厂房Ｔ＝５０～６０￣Ｃ；真空 度＝常压一１０ｍｂａｒ下抽干。然后再按成品干燥条 件下干燥后送质检部检测，并单独放置。 ２．６．６干燥 ①旋转干燥 将碾碎后的成品移人大旋转蒸发球中，用真空 泵抽真空干燥２４小时。干燥条件为：Ｔ＝４０～４５℃， 真空度保持在５０ｍｂａｒ以下，转速控制在２０转／ｍｉｎ 左右。 ②干燥箱干燥 将干燥２４小时后的成品移人洁净的容器中，堆 放厚度不超过１０ｃｍ，用干净棉纸扎好口后放人真空 干燥箱中，在真空度一０．０８～一０．０６Ｍｐａ、Ｔ＝５～ ４５℃下干燥至总的干燥时间为６０—１２０小时。４８ 小时以后，Ｔ＝５～４５￣Ｃ。干燥过程中每隔４小时取 出搅拌、碾磨、称重一次，每次不超过２０分钟。干燥 至恒重（恒重误差≤５％。，目标值≤０．３％ｏ）。 ２．６．７ ３一Ｄ２ａ及３一Ｄ３重结晶 抽干后的３一Ｄ２ａ（或３一Ｄ３）用丙酮、石油醚反 复溶解、重结晶３—５次，直至得到灰白色固形物。 重结晶过程中得到的母液，经ＴＬＣ检测板图一致的 合并，送浓缩工序，浓缩至一定浓度加石油醚重结 晶；重结晶过程中得到的固形物反复溶解、重结，直 至得到灰白色固形物。在重结晶过程中得到的不能 再重结的母液浓缩送检后放置。在重结晶过程中几 次得到的经ＴＬＣ检测确认以紫杉醇点为主，杂质主 要是三尖杉磷碱或７一差向紫杉醇的灰白色固形物 合并在一起，用丙酮溶解形成批次，并按规定给予半 成品批号，在Ｔ＝５０～６０℃；真空度常压～１０ｍｂａｒ下 抽干。数次抽于的半成品在洁净容器中碾细后，再 全部装入蒸发球中在Ｔ＝４０—４５ ，真空度保持在 ５０ｍｂａｒ以下旋转抽干８～１６小时，取出后装入洁净 的容器中用干净绵纸扎好口，帖好标签，送干燥工 序。浓缩过程重结晶回收液用于调配２一Ａ类液。 重结晶条件：时间２Ｏ分钟～４８小时；温度为室 温（５—３０ｃｃ）。 浓缩条件：Ｔ＝５０～６０￣Ｃ；真空度为常压～ １０ｍｂａｒ。 半成品干燥：在Ｔ＝５～４５￣１２；真空度：一０．０８ ～一０．０６Ｍｐａ；干燥厚度不超过１０ｃｍ的条件下干燥 ４８～１２０小时，直至恒重，过程中每４小时取出搅 拌、碾磨并称重（恒重误差≤５％。）。 ２．６．８检测 干燥后的半成品及其它副产物由部门质量管理 员填写请验单，交检测室取样、检测并发放检验报 告。部门质量管理员接到检验报告单后，计算得率， 填写完成批生产记录并交质监部审核。检验结果符 合质量标准，批生产记录审核合格后，由质检部发放 合证。 检测合格的半成品，按生产指令要求，５个工作 日内不投入成品生产，封好盛放半成品的容器，并按 要求用塑料袋包扎好，放入装有干燥剂的塑料袋中， 封好口，记录实际包装重量交给半成品库管员，在室 温下避光保存。 ２．６．９包装、入库 接到成品合格证及包装指令，领取包装材料及 标签。包装前先检查包装材料、标签是否合格，数量 和规格是否与包装指令要求一致，检查无误后按包 装指令包装。包装结束后，必须对包装场所进行清 场，保证包装成品置于Ｔ＝５—３０℃；真空度一０．０８ 一一０．０６Ｍｐａ下干燥２４小时，取出封口并贴好标 签。成品批包装记录经ＱＡ部审核通过后，填写成 品入库单，办理入库手续。 ＱＡ质量检查员必须对包装过程和已包装产品 进行监控、检查。 ３ 结语 本文主要介绍了紫杉醇精提工艺，因紫杉醇原 料稀缺且原料中的紫杉醇含量低，国际上紫杉醇价 格昂贵。此工艺不仅在实验研究上实用，放大到实 际生产上也可行。通过此工艺生产出的紫杉醇含量 超过９９％，达到国际标准且符合美国ＦＤＡ要求。如 能有效解决原料供应问题，用此工艺完成生产能够 满足目前市场的需求。 参考文献（略） （收稿日期：２０１０年１１月１１日）