转录因子ntmyc2b参与烟草烟碱含量杂种优势形成的机制研究

ｄｏｉ:１０.１５９３３/ｊ.ｃｎｋｉ.１００４￣３２６８.２０１９.１１.００７

转录因子ＮｔＭＹＣ２ｂ参与烟草烟碱含量

杂种优势形成的机制研究

(１.贵州大学农学院ꎬ贵州贵阳５５００２５ꎻ２.贵州大学贵州省烟草品种研究重点实验室ꎬ

吴宇瑶１ꎬ２ꎬ谢　瑞３ꎬ杨友成４ꎬ刘坤华４ꎬ聂　琼１ꎬ２

贵州贵阳５５００２５ꎻ３.遵义市农业科学研究院ꎬ贵州遵义５６３０００ꎻ４.遵义市烟草公司ꎬ贵州遵义５６３０００)

摘要:为探讨ｂＨＬＨ转录因子家族成员ＭＹＣ２ｂ基因与烟叶中烟碱含量及烟碱含量杂种优势表现的相关性ꎬ利用ＲＴ－ｑＰＣＲ分析ＮｔＭＹＣ２ｂ基因与烟碱合成途径关键酶基因的表达ꎬ测定烟碱含量和烟碱杂种优势表现ꎮ结果表明ꎬ移栽后８０ｄꎬＮｔＭＹＣ２ｂ在烟草亲本ＧＤＨ８８和巴斯玛根部的表达量较移栽后６６ｄ上调ꎬ其根和叶中烟碱含量增加ꎬ杂交种根中ＮｔＭＹＣ２ｂ、鸟氨酸脱羧酶基因(ＯＤＣ)、精氨酸脱羧酶基因(ＡＤＣ)、Ｎ－甲基转移酶基因(ＰＭＴ)、Ｎ－甲基腐胺氧化酶基因(ＭＰＯ)的表达量相对于亲本平均表达量均明显上调ꎬ且除ＭＰＯ外ꎬＮｔＭＹＣ２ｂ与ＯＤＣ、ＡＤＣ、ＰＭＴ、ＱＰＴ(喹啉酸磷酸核糖转移酶基因)在强优势组合ＶＡ１１６×巴斯玛中的相对表达量均明显高于弱优势组合ＶＡ１１６×ＧＤＨ８８ꎬ根和叶中烟碱含量及其杂种优势表现也具有相同的趋势ꎬ表明ＮｔＭＹＣ２ｂ参与了烟碱的合成ꎬ还可能参与了烟碱含量杂种优势的形成ꎮ相关性分析表明ꎬ在亲本根部ꎬＮｔＭＹＣ２ｂ表达量与ＰＭＴ表达量呈显著正相关ꎻ在杂交种根部ꎬＮｔＭＹＣ２ｂ表达量与ＡＤＣ、ＭＰＯ表达量呈显著正相关ꎻ在杂交种叶片中ꎬＮｔＭＹＣ２ｂ表达量与烟碱含量杂种优势呈显著正相关ꎬＰＭＴ表达量与ＯＤＣ、ＡＤＣ表达量均呈显著正相关ꎮ关键酶基因启动子序列分析表明ꎬＡＤＣ中含有１个ＭＹＣ结合位点和１个Ｇ－ｂｏｘ元件ꎻＰＭＴ中含有７个ＭＹＣ结合位点和１个Ｇ－ｂｏｘ元件ꎮ推测ＮｔＭＹＣ２ｂ可能通过与ＡＤＣ、ＰＭＴ的顺式元件ＭＹＣ结合位点或Ｇ－ｂｏｘ元件特异性结合调控ＡＤＣ、ＰＭＴ的表达ꎬ进而促进烟碱的合成ꎬ且ＮｔＭＹＣ２ｂ还参与了烟碱含量杂种优势的形成ꎮ关键词:烟草ꎻ转录因子ꎻＮｔＭＹＣ２ｂꎻ烟碱ꎻ杂种优势

中图分类号:Ｓ５７２　　文献标志码:Ａ　　文章编号:１００４－３２６８(２０１９)１１－００４５－０９

ＶａｒｉｅｔｙＲｅｓｅａｒｃｈꎬＧｕｉｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＧｕｉｙａｎｇ５５００２５ꎬＣｈｉｎａꎻ３.ＺｕｎｙｉＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅꎬＺｕｎｙｉ５６３０００ꎬＣｈｉｎａꎻ

４.ＺｕｎｙｉＴｏｂａｃｃｏＣｏｍｐａｎｙꎬＺｕｎｙｉ５６３０００ꎬＣｈｉｎａ)

(１.ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅꎬＧｕｉｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＧｕｉｙａｎｇ５５００２５ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＧｕｉｚｈｏｕＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＴｏｂａｃｃｏ

ＷＵＹｕｙａｏ１ꎬ２ꎬＸＩＥＲｕｉ３ꎬＹＡＮＧＹｏｕｃｈｅｎｇ４ꎬＬＩＵＫｕｎｈｕａ４ꎬＮＩＥＱｉｏｎｇ１ꎬ２

ＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＦａｃｔｏｒＮｔＭＹＣ２ｂＩｓＩｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅＦｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＨｅｔｅｒｏｓｉｓｏｆＮｉｃｏｔｉｎｅＣｏｎｔｅｎｔＴｒａｉｔ

Ａｂｓｔｒａｃｔ:ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒＭＹＣ２ｂａｎｄｎｉｃｏｔｉｎｅｃｏｎｔｅｎｔａｎｄｉｔｓｈｅｔｅｒｏｓｉｓｉｎｔｏｂａｃｃｏꎬＲＴ￣ｑＰＣＲｗａｓｕｓｅｄｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮｔＭＹＣ２ｂａｎｄｋｅｙｅｎｚｙｍｅｇｅｎｅｓｉｎｔｈｅｎｉｃｏｔｉｎｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓｐａｔｈｗａｙꎬａｎｄｔｈｅｎｉｃｏｔｉｎｅｃｏｎｔｅｎｔａｎｄｉｔｓｈｅｔｅｒｏｓｉｓｉｎｒｏｏｔｓａｎｄｌｅａｖｅｓｏｆｔｏｂａｃｃｏｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｅｄ.ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮｔＭＹＣ２ｂｉｎｐａｒｅｎｔｒｏｏｔｓ(ＧＤＨ８８ａｎｄＢａｓ￣ｍａ)ｗａｓｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄａｔ８０ｄｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈ６６ｄａｆｔｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇꎬａｎｄｔｈｅｉｒｎｉｃｏｔｉｎｅｃｏｎｔｅｎｔｉｎｒｏｏｔａｎｄ

收稿日期:２０１９－０５－２２

基金项目:贵州省烟草公司项目(黔烟科２０１３０２)ꎻ贵州省烟草公司重大专项(黔烟科２０１６０２)ꎻ贵州省烟草公司遵义市公司项

目(遵烟计[２０１６]０７号)ꎻ贵州省烟草品质遗传改良与生物转化科技创新人才团队项目(黔科合人才团队[２０１５]４００１)

作者简介:吴宇瑶(１９９３－)ꎬ女ꎬ贵州黎平人ꎬ在读硕士研究生ꎬ研究方向:烟草遗传育种ꎮＥ－ｍａｉｌ:１５７６１６３０１７０＠１６３.ｃｏｍ通信作者:聂　琼(１９７２－)ꎬ女ꎬ贵州毕节人ꎬ教授ꎬ博士ꎬ主要从事烟草遗传育种研究ꎮＥ－ｍａｉｌ:ｎｑｉｏｎｇ１０＠１６３.ｃｏｍ

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河南农业科学第４８卷

ｌｅａｖｅｓｗａｓａｌｓｏｉｎｃｒｅａｓｅｄ.ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＮｔＭＹＣ２ｂꎬｏｒｎｉｔｈｉｎｅｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅｇｅｎｅ(ＯＤＣ)ꎬａｒｇｉｎｉｎｅｄｅ￣ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅｇｅｎｅ(ＡＤＣ)ꎬｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅ￣Ｎ￣ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｇｅｎｅ(ＰＭＴ)ａｎｄＮ￣ｍｅｔｈｙｌｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅｏｘｉｄａｓｅｇｅｎｅ(ＭＰＯ)ｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄｉｎｒｏｏｔｏｆｈｙｂｒｉｄｒｅｌａｔｉｖｅｔｏｔｈｅｉｒｐａｒｅｎｔｓ.Ｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓ￣ｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＮｔＭＹＣ２ｂꎬＯＤＣꎬＡＤＣꎬＰＭＴａｎｄＱＰＴ(ｑｕｉｎｏｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｇｅｎｅ)ｉｎｔｈｅｓｔｒｏｎｇｈｅｔｅｒｏｓｉｓｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ(ＶＡ１１６×Ｂａｓｍａ)ｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｗｅａｋｈｅｔｅｒｏｓｉｓｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ(ＶＡ１１６×ＧＤＨ８８)ꎬｍｅａｎｗｈｉｌｅꎬｔｈｅｎｉｃｏｔｉｎｅｃｏｎｔｅｎｔａｎｄｉｔｓｈｅｔｅｒｏｓｉｓａｌｓｏｓｈｏｗｅｄｔｈｅｓａｍｅｔｒｅｎｄｉｎｒｏｏｔｓａｎｄｌｅａｖｅｓｏｆｈｙｂｒｉｄ.ＩｔｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔＮｔＭＹＣ２ｂｗａｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｎｉｃｏｔｉｎｅａｎｄｍｉｇｈｔａｌｓｏｂｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｈｅｔｅｒｏｓｉｓｏｆｎｉｃｏｔｉｎｅｃｏｎｔｅｎｔ.ＣｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮｔＭＹＣ２ｂｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈＰＭＴｉｎｔｈｅｐａｒｅｎｔｒｏｏｔｓꎬｔｈｅｓａｍｅｗｉｔｈＡＤＣａｎｄＭＰＯｉｎｈｙｂｒｉｄｒｏｏｔｓ.ＭｏｒｅｏｖｅｒꎬｂｅｔｗｅｅｎＮｔＭＹＣ２ｂｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｎｉｃｏｔｉｎｉｃｃｏｎｔｅｎｔｈｅｔｅｒｏｓｉｓꎬｂｅｔｗｅｅｎＰＭＴｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄＯＤＣａｎｄＡＤＣｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎꎬｗａｓａｌｓｏａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｒｒｅｌａ￣ｔｉｏｎｉｎｈｙｂｒｉｄｌｅａｖｅｓ.ＳｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｐｒｏｍｏｔｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＡＤＣｃｏｎｔａｉｎｅｄ１ＭＹＣｂｉｎｄｉｎｇｓｉｔｅａｎｄ１Ｇ￣ｂｏｘｅｌｅｍｅｎｔꎬｔｈｅｐｒｏｍｏｔｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＰＭＴｃｏｎｔａｉｎｅｄ７ＭＹＣｂｉｎｄｉｎｇｓｉｔｅｓａｎｄ１Ｇ￣ｂｏｘｅｌｅｍｅｎｔ.ＴｈｅｒｅｆｏｒｅꎬｉｔｉｓｓｐｅｃｕｌａｔｅｄｔｈａｔＮｔＭＹＣ２ｂｍａｙｒｅｇｕｌａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＡＤＣａｎｄＰＭＴｂｙｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙｂｉｎｄｉｎｇｗｉｔｈｃｉｓ￣ｅｌｅｍｅｎｔＭＹＣｂｉｎｄｉｎｇｓｉｔｅｏｒＧ￣ｂｏｘｅｌｅｍｅｎｔｔｏｐｒｏｍｏｔｅｔｈｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｎｉｃｏ￣ｔｉｎｅ.ＴｈｅｓｅｆｉｎｄｉｎｇｓｓｕｇｇｅｓｔｔｈａｔＮｔＭＹＣ２ｂｉｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｎｉｃｏｔｉｎｅａｎｄｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｈｅｔ￣ｅｒｏｓｉｓｉｎｎｉｃｏｔｉｎｅｃｏｎｔｅｎｔ.

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＴｏｂａｃｃｏꎻＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓꎻＮｔＭＹＣ２ｂꎻＮｉｃｏｔｉｎｅꎻＨｅｔｅｒｏｓｉｓ　　转录因子(Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ)又名反式作用因子ꎬ是一种行使调控基因表达功能且具有特殊结构的蛋白质分子ꎬ能特异性地识别并结合顺式元件启动子区域的核心序列ꎬ从而调控靶基因的转录

[１￣２]

烟草品质的重要指标之一[１７]ꎬ也是将其应用于医药、化工及农药防治[１８￣２０]等方面的依据ꎮ杂种优势利用是作物品种改良的一种重要手段ꎬ已逐渐成为进一步提高动植物产量、品质、抗病性及社会经济效益的有效措施[２１]ꎬ利用杂种优势选育不同烟碱含量的烟草品种ꎬ将其应用于烟叶生产、医药及农药防治有着实践意义ꎮ目前ꎬ烟碱含量杂种优势的形成机制尚未得到阐明ꎬ且在转录因子水平上关于烟碱杂种优势的研究报道还比较少ꎮ

转录因子可以作为分子开关与结构基因启动子特异结合ꎬ通过调控结构基因的表达ꎬ高效诱导或抑制目标代谢产物的积累[２２￣２４]ꎮ因此ꎬ开展烟碱生物合成相关转录因子及结构基因的表达研究ꎬ进一步研究转录因子参与调控烟碱生物合成的分子机制和烟碱含量杂种优势的形成机制ꎬ对于提高烟草的品质和工业应用价值具有重要意义ꎮ

转录因子的调控过程是植物信号传导的关键环节ꎬ广泛参与植物初生和次生代谢产物合成[３￣４]等各种生物学过程ꎬ调控植物的生长发育ꎮ目前ꎬ植物中已经鉴定出的转录因子有多种

[５￣７]

ꎮ

ｂＨＬＨ转录因子家族ꎬ在茉莉酸(ＪＡ)信号传导途径中处于核心地位ꎬ发挥着重要作用[８]ꎮＺＨＡＮＧ等[９]在烟草中克隆得到２个ＭＹＣ２基因ꎬ命名为Ｎｔ￣ＭＹＣ２ａ和ＮｔＭＹＣ２ｂꎬ研究发现ꎬ这２个转录因子基因影响尼古丁的合成ꎬ在体外也能特异性结合烟碱合成关键酶Ｎ－甲基转移酶基因(ＰＭＴ)启动子的Ｇ－ｂｏｘ区域ꎬ调控ＰＭＴ基因的表达ꎮ的吡咯环和吡啶环合成

[１０]

ꎬ其中ＭＹＣ２属于

烟碱由２个不同的含氮环即具有２种合成途径

ꎮ在吡咯环途径中ꎬ鸟氨

酸脱羧酶(ＯＤＣ)可直接使鸟氨酸脱羧形成腐胺[１１]ꎬ或者间接通过精氨酸脱羧酶(ＡＤＣ)介导精氨酸脱羧形成腐胺[１２]ꎮ继而ꎬ腐胺被Ｎ－甲基转移酶腐胺被Ｎ－甲基腐胺氧化酶(ＭＰＯ)催化ꎬ形成烟碱的直接前体物质ꎮ在吡啶环途径ꎬ喹啉酸磷酸核糖(ＰＭＴ)催化ꎬ形成Ｎ－甲基腐胺[１３]ꎮ最后ꎬＮ－甲基转移酶(ＱＰＴ)是烟碱合成代谢中的限速酶[１４]ꎮ研究表明ꎬＰＭＴ过量表达可以增加烟叶中的烟碱含量[１５]ꎬ而通过反义ＲＮＡ技术沉默ＰＭＴ表达可以降低烟叶中的烟碱含量[１６]ꎮ烟碱含量的高低是评价

１　材料和方法

１.１　材料

(ＶＡ１１６×ＧＤＨ８８和ＶＡ１１６×巴斯玛)均由贵州大学烟草实验室提供ꎮ其中ꎬＶＡ１１６×巴斯玛和ＶＡ１１６×ＧＤＨ８８分别为贵州大学烟草实验室在前势的强优势组合和弱优势组合ꎮ材料栽种于贵州大８０ｄ采样ꎬ每次选取长势一致的３株ꎬ取其根和中部学烟草试验基地ꎬ分别在烟株移栽后６６ｄ和移栽后期研究杂交组配中筛选鉴定出来的烟碱含量杂种优

烟草亲本ＶＡ１１６、ＧＤＨ８８、巴斯玛及其杂交种

　第１１期吴宇瑶等:转录因子ＮｔＭＹＣ２ｂ参与烟草烟碱含量杂种优势形成的机制研究

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１.２　方法

叶片立即放入液氮冷冻ꎬ于－８０℃冰箱保存备用ꎮ为５′－ＴＡＡＣＡＡＡＣＧＡＴＴＧＧＧＴＣＡ－３′ꎮ所有引物由上海生物工程股份有限公司合成ꎮＲＴ－ｑＰＣＲ的反１０μＬꎬ上下游引物各０.８μＬꎬｃＤＮＡ模板２μＬꎬ９５℃预变性１５ｓ、９５℃变性１０ｓꎬ６０℃退火２０ｓꎬ７２℃延伸１５ｓꎬ４０个循环ꎮ采用２－△△Ｃｔ法计算并分１.２.４　烟碱合成关键酶基因启动子序列中ＭＹＣ结合位点分析　利用ＰｌａｎｔＣＡＲＥ在线软件分析关键酶基因的启动子序列是否含有ＭＹＣ结合位点ꎬ预测１.３　数据处理与分析ＭＹＣ２ｂ调控的酶基因ꎮ

所有原始数据均来自３个生物学重复ꎬ即重复析ＲＴ－ｑＰＣＲ的数据ꎮ

ｄｄＨ２Ｏ６.４μＬꎬ每个反应重复３次ꎮ反应程序为:应体系２０μＬ:ＴｒａｎｓＳｔａｒｔＧｒｅｅｎｑＰＣＲＳｕｐｅｒＭｉｘ

１.２.１　烟碱含量测定及杂种优势计算　烟碱含量测定采用紫外分光光度法[２５]进行ꎬ计算公式:

烟碱含量＝

１.０５９×Ａ２５９－

Ｖ３Ａ２３６＋Ａ２８２

×Ｖ１××１００％

Ｖ２２

ꎮ

ｍ×(１－含水率)×３４.３

[]

数ꎬＡ２５９、Ａ２３６、Ａ２８２分别表示在波长为２５９、２３６、２８２ｎｍ处测得的吸光值ꎬＶ１、Ｖ２、Ｖ３分别表示原测液体积、原ｍ表示原测液制备中所称取的样品质量ꎮ

杂种优势的计算方法:

正向超亲优势＝(Ｆ１－ＨＰ)/ＨＰ×１００％ꎬ中亲优势＝(Ｆ１－ＭＰ)/ＭＰ×１００％ꎬ负向超亲优势＝(Ｆ１－ＬＰ)/ＬＰ×１００％ꎮ测液稀释后的待测液体积、空白对照的参比液体积ꎬ

式中ꎬ１.０５９是与硅乌酸重量法相比的校正系

３次的试验结果ꎮ采用２－△△Ｃｔ法计算ＲＴ－ｑＰＣＲ的６６、８０ｄ不同组织(根与中部叶片)中的表达情况ꎮ运用Ｅｘｃｅｌ和ＳＰＳＳ２１.０软件ꎬ统计并分析ＮｔＭＹＣ２ｂ关性ꎮ

的相对表达量、烟碱含量及酶基因表达量间的相数据ꎬ分析ＮｔＭＹＣ２ｂ与５个关键酶基因在移栽后

式中ꎬＨＰ为双亲中的最高值ꎬＭＰ为双亲平均１.２.２　ＲＮＡ提取与ｃＤＮＡ第一链合成　取不同组织(根与叶)在液氮下充分研磨成粉末ꎬ按照ＯＭＥ￣ＧＡＴｏｔｌｅＲＮＡＫｉｔⅠ试剂盒(京工生物公司)说明书提取总ＲＮＡꎮ总ＲＮＡ经过Ｎａｎｏｄｒｏｐ２０００紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测浓度和完整性后ꎬ根据反转录试剂盒ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭⅡ１ｓｔＳｔｒａｎｄｃＤＮＡ合成ꎬ－２０℃保存备用ꎮ

ＳｙｎｔｈｅｓｉｓＫｉｔ(ＴａＫａＲａ)的说明书进行ｃＤＮＡ第一链１.２.３　ＲＴ－ｑＰＣＲ与分析　采用ＲＴ－ｑＰＣＲ分析ＱＰＴ、ＭＰＯ的表达ꎬ以烟草持家基因Ａｃｔｉｎ－２、ＨＳＣ７０－１为内参基因ꎮ各关键酶基因和持家基因的ＰＣＲ引物参照文献[２６]ꎮ在ＮＣＢＩ数据库中查找Ｎｔ￣ＭＹＣ２ｂꎬ根据Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ引物设计原则ꎬ利用ＰｒｉｍｅｒＰｒｅｍｉｅｒ５.０软件设计目的基因引物ꎬ上游引物为５′－ＡＧＡＡＧＧＴＴＣＴＡＣＧＧＧＡＧＣ－３′ꎬ下游引物ＮｔＭＹＣ２ｂ及烟碱合成关键酶基因ＯＤＣ、ＰＭＴ、ＡＤＣ、值ꎬＬＰ为双亲中的最低值ꎬＦ１为杂交１代值ꎮ

２　结果与分析

表现分析

２.１　烟草杂交种及其亲本的烟碱含量与杂种优势

ＶＡ１１６×ＧＤＨ８８和ＶＡ１１６×巴斯玛及其亲本

ＶＡ１１６、ＧＤＨ８８、巴斯玛烟株不同时期、不同组织的烟碱含量及其杂种优势表现见表１和表２ꎮ从表１可见ꎬ移栽后６６ｄꎬ烟草根中的烟碱含量高于叶中ꎬ６６ｄ相比ꎬ移栽后８０ｄ除ＶＡ１１６根中烟碱含量稍有降低外ꎬ其余材料相同部位的烟碱含量均增加ꎻ无论不同取样时间ꎬ还是不同部位ꎬＶＡ１１６×巴斯玛的烟碱含量均高于２个亲本ꎬ而ＶＡ１１６×ＧＤＨ８８的烟碱含量均介于２个亲本之间ꎮ

％

而移栽后８０ｄꎬ叶中的烟碱含量高于根中ꎻ与移栽后

表１　不同时期烟草亲本和杂交种根与叶中的烟碱含量

Ｔａｂ.１　Ｎｉｃｏｔｉｎｅｃｏｎｔｅｎｔｉｎｒｏｏｔｓａｎｄｌｅａｖｅｓｏｆｔｏｂａｃｃｏｐａｒｅｎｔｓａｎｄｈｙｂｒｉｄｓａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｔａｇｅｓ

采样时间Ｓａｍｐｌｉｎｇｔｉｍｅ移栽后６６ｄ移栽后８０ｄ

部位Ｐａｒｔ根Ｒｏｏｔ根Ｒｏｏｔ叶Ｌｅａｆ叶Ｌｅａｆ

ＶＡ１１６１.１２０.８９１.０９１.６７

ＧＤＨ８８１.４４１.１４１.５７１.８９

巴斯玛Ｂａｓｍａ１.１６０.９３１.５１１.９２

ＶＡ１１６×ＧＤＨ８８

１.３４１.１１１.４０１.７１

ＶＡ１１６×巴斯玛ＶＡ１１６×Ｂａｓｍａ

２.０７

１.７８２.４５３.５３

６６ｄａｆｔｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ８０ｄａｆｔｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ

　　由表２可知ꎬ移栽后６６ｄ和８０ｄꎬＶＡ１１６×巴斯玛和ＶＡ１１６×ＧＤＨ８８根与叶烟碱含量的杂种优势

表现一致ꎬ且ＶＡ１１６×巴斯玛根与叶中的烟碱含量均表现为正向超亲优势ꎬ而ＶＡ１１６×ＧＤＨ８８均表现

４８

河南农业科学

表２　不同时期烟草杂交种烟碱含量的杂种优势表现

Ｔａｂ.２　Ｈｅｔｅｒｏｓｉｓｏｆｎｉｃｏｔｉｎｅｃｏｎｔｅｎｔｉｎｔｏｂａｃｃｏｈｙｂｒｉｄｌｉｎｅｓａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｔａｇｅｓ

第４８卷

％

负向超亲优势Ｎｅｇａｔｉｖｅｓｕｐｅｒ￣ｐａｒｅｎｔ

ａｄｖａｎｔａｇｅ１９.６４８４.８２２４.７２２８.４４２３.９６

采样时间Ｓａｍｐｌｉｎｇｔｉｍｅ

６６ｄａｆｔｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ移栽后６６ｄ

部位Ｐａｒｔ根Ｒｏｏｔ叶Ｌｅａｆ根Ｒｏｏｔ叶Ｌｅａｆ

杂交种ＨｙｂｒｉｄＶＡ１１６×ＧＤＨ８８ＶＡ１１６×ＧＤＨ８８ＶＡ１１６×ＧＤＨ８８ＶＡ１１６×ＧＤＨ８８ＶＡ１１６×巴斯玛ＶＡ１１６×巴斯玛ＶＡ１１６×巴斯玛ＶＡ１１６×巴斯玛

正向超亲优势Ｐｏｓｉｔｉｖｅｓｕｐｅｒ￣ｐａｒｅｎｔ

ａｄｖａｎｔａｇｅ－７.１６－２６.３２－１０.８２－９.５２８３.８５６２.２５９１.４０７８.４５

中亲优势Ｍｉｄ￣ｐａｒｅｎｔａｄｖａｎｔａｇｅ４.５５８１.５８９５.６０８８.４６９６.６６５.２６９.３６

８０ｄａｆｔｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ

移栽后８０ｄ

１００.００１２４.７７１１１.３８

－３.９３

２.２　烟草ＮｔＭＹＣ２ｂ以及烟碱合成途径关键酶基因的表达分析

由图１可见ꎬ移栽后８０ｄ烟草各亲本根中Ｎｔ￣ＭＹＣ２ｂ、ＰＭＴ和ＡＤＣ的表达量相对于移栽后６６ｄ明显上调ꎬ而ＱＰＴ表达量则明显下调ꎮ其中ꎬＶＡ１１６、ＧＤＨ８８、巴斯玛根中ＮｔＭＹＣ２ｂ的表达量分别是移栽后６６ｄ的２.９７倍、１１.１９倍、４.２５倍ꎮ巴斯玛根中ＯＤＣ的表达量明显上调ꎬＶＡ１１６和

为弱的中亲优势ꎮ

ＧＤＨ８８根中ＯＤＣ的表达量略有下调ꎻＧＤＨ８８和巴斯玛根中ＭＰＯ的表达量略有上调ꎬＶＡ１１６根中ＭＰＯ的表达量略有下调ꎮ移栽后８０ｄ烟草各亲本叶片中ＯＤＣ、ＰＭＴ、ＡＤＣ、ＱＰＴ的表达量相对于移栽后６６ｄ明显上调ꎻＶＡ１１６、ＧＤＨ８８、巴斯玛叶片中１.０２倍、０.３９倍ꎻＶＡ１１６和ＧＤＨ８８叶片中ＭＰＯ的表达量较移栽后６６ｄ上调ꎬ而巴斯玛叶片中ＭＰＯ的表达量下调ꎮ

ＮｔＭＹＣ２ｂ的表达量分别是移栽后６６ｄ的０.９２倍、

图１　移栽后８０ｄ与移栽后６６ｄ烟草亲本ＮｔＭＹＣ２ｂ及关键酶基因的相对表达量Ｆｉｇ.１　ＲｅｌａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＮｔＭＹＣ２ｂａｎｄｋｅｙｅｎｚｙｍｅｇｅｎｅｓｉｎｔｏｂａｃｃｏ

ｐａｒｅｎｔｓａｔ８０ｄａｙｓｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈ６６ｄａｙｓａｆｔｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇ

ＡａｎｄＢｒｅｐｒｅｓｅｎｔｒｏｏｔｓａｎｄｌｅａｖｅｓｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ

Ａ、Ｂ分别表示根、叶

　　由图２显示ꎬ移栽后８０ｄꎬ杂交种根中Ｎｔ￣

优势组合ＶＡ１１６×巴斯玛叶中的表达量分别是亲本平均表达量的１.４１倍、７３.７５倍ꎻＯＤＣ、ＭＰＯ和ＱＰＴ的相对表达量在ＶＡ１１６×ＧＤＨ８８中分别表现为下调、明显上调和下调ꎬ而在ＶＡ１１６×巴斯玛中的表现则相反ꎬ表现为明显上调、下调和明显上调ꎮ

ＲＴ－ｑＰＣＲ结果表明ꎬＮｔＭＹＣ２ｂ和５个关键酶

ＭＹＣ２ｂ、ＯＤＣ、ＰＭＴ、ＡＤＣ、ＭＰＯ的表达量均较２个亲本平均表达量明显上调ꎬ其中ＮｔＭＹＣ２ｂ在弱优势组合ＶＡ１１６×ＧＤＨ８８和强优势组合ＶＡ１１６×巴斯玛６９.７５倍ꎻＱＰＴ在ＶＡ１１６×ＧＤＨ８８根中的表达量较亲本平均表达量略有下调ꎬ而在ＶＡ１１６×巴斯玛根中则明显上调ꎮ杂交种叶片中ＮｔＭＹＣ２ｂ与ＰＭＴ、ＡＤＣ的表达量较２个亲本平均表达量也明显上调ꎬ其中ＮｔＭＹＣ２ｂ在弱优势组合ＶＡ１１６×ＧＤＨ８８和强根中的表达量分别是亲本平均表达量的１８.９６倍、

基因在３个亲本和２个杂交种的根部和叶片中均有表达ꎮ图１Ａ和图２Ａ表明ꎬＮｔＭＹＣ２ｂ在烟草杂交种和亲本根中的相对表达量均高于５个关键酶基因ꎬ表达量较移栽后６６ｄ上调ꎬ较亲本平均值也上调ꎮ

　第１１期吴宇瑶等:转录因子ＮｔＭＹＣ２ｂ参与烟草烟碱含量杂种优势形成的机制研究

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此外ꎬ由图２可知ꎬ无论在根或叶中ꎬ除ＭＰＯ外ꎬＮｔ￣ＭＹＣ２ｂ与其他４个关键酶基因在强优势组合ＶＡ１１６×巴斯玛中的相对表达量都明显高于弱优势组合ＶＡ１１６×ＧＤＨ８８ꎬ且在ＶＡ１１６×巴斯玛根与叶中的相对表达量较亲本平均表达量均表现出明显上

调ꎬ而在ＶＡ１１６×ＧＤＨ８８中ＱＰＴ下调且其他基因上调也不明显ꎮ结合烟碱含量分析ꎬＮｔＭＹＣ２ｂ可能是烟碱合成的调控因子ꎬ其表达在烟碱含量杂种优势的形成上扮演着一定角色ꎮ

图２　移栽后８０ｄ烟草杂交种与亲本(平均)ＮｔＭＹＣ２ｂ及关键酶基因的相对表达量

Ｆｉｇ.２　ＲｅｌａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＮｔＭＹＣ２ｂａｎｄｋｅｙｅｎｚｙｍｅｇｅｎｅｓｏｆｔｏｂａｃｃｏｈｙｂｒｉｄｓｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈ

ｐａｒｅｎｔａｌ(ａｖｅｒａｇｅ)ａｔ８０ｄａｙｓａｆｔｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇ

ＡａｎｄＢｒｅｐｒｅｓｅｎｔｒｏｏｔｓａｎｄｌｅａｖｅｓｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ

Ａ、Ｂ分别表示根、叶

２.３　ＮｔＭＹＣ２ｂ、关键酶基因表达量与烟碱含量及杂种优势的相关分析

表３显示ꎬ在亲本根部ꎬＮｔＭＹＣ２ｂ表达量与烟碱含量呈正相关(Ｐ>０.０５)ꎬ而与ＰＭＴ表达量呈显著正相关ꎬ相关系数为０.８８ꎻ此外ꎬＡＤＣ表达量与烟碱

含量呈显著正相关ꎬ相关系数为０.９４ꎮ在杂交种根部(表４)ꎬＮｔＭＹＣ２ｂ表达量与烟碱含量及其杂种优势呈正相关(Ｐ>０.０５)ꎬ但与ＡＤＣ、ＭＰＯ表达量呈显著正相关ꎬ相关系数分别为０.９６、０.９７ꎻ此外ꎬＡＤＣ表达量与ＭＰＯ表达量呈显著正相关ꎬ相关系数为０.９８ꎮ

表３　烟草亲本根中ＮｔＭＹＣ２ｂ、关键酶基因表达量与烟碱含量间的相关系数Ｔａｂ.３　ＣｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｂｅｔｗｅｅｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮｔＭＹＣ２ｂꎬｋｅｙｅｎｚｙｍｅｇｅｎｅａｎｄ

ｎｉｃｏｔｉｎｅｃｏｎｔｅｎｔｉｎｔｏｂａｃｃｏｐａｒｅｎｔａｌｒｏｏｔｓ

ＮｔＭＹＣ２ｂ

指标Ｉｎｄｅｘ

ＮｔＭＹＣ２ｂ表达量ＮｔＭＹＣ２ｂｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＯＤＣ表达量ＯＤＣｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＡＤＣ表达量ＡＤＣｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＰＭＴ表达量ＰＭＴｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＱＰＴ表达量ＱＰＴｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＭＰＯ表达量ＭＰＯｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ烟碱含量Ｎｉｃｏｔｉｎｅｃｏｎｔｅｎｔ

表达量ＮｔＭＹＣ２ｂｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

１

ＯＤＣ表达量

ＯＤＣｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ＡＤＣ表达量

ＡＤＣｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ＰＭＴ表达量

ＰＭＴｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ＱＰＴ表达量

ＱＰＴｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ＭＰＯ表达量

ＭＰＯｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

烟碱含量Ｎｉｃｏｔｉｎｅｃｏｎｔｅｎｔ

０.１４０.５２０.８８∗－０.７８０.３３０.４９

１－０.１５－０.１２－０.２０－０.１２－０.０９

１０.２７－０.３８－０.０７０.９４∗

１－０.５２０.６７０.３５

１０.２６－０.１９

１０.２１

１

　注:∗表示显著相关(Ｐ<０.０５)ꎮ

　Ｎｏｔｅ:∗ｉｎｄｉｃａｔｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ(Ｐ<０.０５).

５０

河南农业科学

表４　烟草杂交种根中ＮｔＭＹＣ２ｂ、关键酶基因表达量与烟碱含量间的相关系数Ｔａｂ.４　ＣｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｂｅｔｗｅｅｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮｔＭＹＣ２ｂꎬｋｅｙｅｎｚｙｍｅｇｅｎｅａｎｄ

ｎｉｃｏｔｉｎｅｃｏｎｔｅｎｔｉｎｔｏｂａｃｃｏｈｙｂｒｉｄｒｏｏｔｓ

Ｉｎｄｅｘ指标

ＮｔＭＹＣ２ｂ表达量ＮｔＭＹＣ２ｂｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

１０.８３０.９６∗０.３４－０.６９０.９７∗０.４３０.３５

１０.６７－０.１６－０.３４０.６７０.４３０.３４

１０.５９－０.６２０.９８∗０.５７０.５２

１－０.２４０.５２０.５１０.５５

１－０.７６０.３００.３５

ＯＤＣ表达量ＯＤＣｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ＡＤＣ表达量ＡＤＣｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ＰＭＴ表达量ＰＭＴｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ＱＰＴ表达量ＱＰＴｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

第４８卷

ＭＰＯ表达量ＭＰＯｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ＮｔＭＹＣ２ｂ表达量ＮｔＭＹＣ２ｂｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ＯＤＣ表达量ＯＤＣｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＡＤＣ表达量ＡＤＣｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＰＭＴ表达量ＰＭＴｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＱＰＴ表达量ＱＰＴｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＭＰＯ表达量ＭＰＯｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＮｉｃｏｔｉｎｅｃｏｎｔｅｎｔ杂种优势Ｈｅｔｅｒｏｓｉｓ烟碱含量

１０.３９０.３３

在杂交种叶片(表５)中ꎬＮｔＭＹＣ２ｂ表达量与杂种优势显著正相关ꎬ相关系数为０.９７ꎻＰＭＴ表达量与０.９８ꎮ可见ꎬＰＭＴ、ＡＤＣ、ＭＰＯ３个关键酶基因在烟ＯＤＣ、ＡＤＣ表达量呈显著正相关ꎬ相关系数均为

碱合成过程中可能受到ＮｔＭＹＣ２ｂ的调控ꎬ且关键酶基因间也可能存在互作关系ꎻ杂交种叶片中Ｎｔ￣ＭＹＣ２ｂ表达量与烟碱含量杂种优势关系密切ꎮ

表５　烟草杂交种叶中ＮｔＭＹＣ２ｂ、关键酶基因表达量与烟碱含量间的相关系数Ｔａｂ.５　ＣｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｂｅｔｗｅｅｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮｔＭＹＣ２ｂꎬｋｅｙｅｎｚｙｍｅｇｅｎｅａｎｄ

ｎｉｃｏｔｉｎｅｃｏｎｔｅｎｔｉｎｔｏｂａｃｃｏｈｙｂｒｉｄｌｅａｖｅｓ

Ｉｎｄｅｘ指标

ＮｔＭＹＣ２ｂ表达量ＮｔＭＹＣ２ｂｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

１０.４２０.１３０.２５０.８００.５４０.８６０.９７∗

１０.９３０.９８∗０.８８－０.０２　０.６２０.３５

１０.９８∗０.６８０.３３０.３００.０１

１０.７８０.１４０.４７０.１６

１－０.３１　０.８７０.７４

１－０.７４　０.７２

ＯＤＣ表达量ＯＤＣｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ＡＤＣ表达量ＡＤＣｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ＰＭＴ表达量ＰＭＴｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ＱＰＴ表达量ＱＰＴｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ＭＰＯ表达量ＭＰＯｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ＮｔＭＹＣ２ｂ表达量ＮｔＭＹＣ２ｂｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ＯＤＣ表达量ＯＤＣｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＡＤＣ表达量ＡＤＣｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＰＭＴ表达量ＰＭＴｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＱＰＴ表达量ＱＰＴｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＭＰＯ表达量ＭＰＯｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＮｉｃｏｔｉｎｅｃｏｎｔｅｎｔ杂种优势Ｈｅｔｅｒｏｓｉｓ烟碱含量

２.４　烟碱合成关键酶基因启动子序列中ＭＹＣ结合位点分析

Ｇ－ｂｏｘ被证明是与ＭＹＣ２转录因子结合的核

可见ꎬＡＤＣ与ＰＭＴ的启动子序列中都含有ＭＹＣ结合位点和Ｇ－ｂｏｘ区域ꎮ其中ꎬ在ＡＤＣ启动子反义链７００ｂｐ处含有１个ＭＹＣ结合位点(ＣＡＴＴＴＧ)ꎬ正义链１９５７ｂｐ处有１个Ｇ－ｂｏｘ元件(ＣＡＣＧＴＴ)ꎮＰＭＴ启动子中含有７个ＭＹＣ结合位点ꎬ分别有３个ＣＡＴＴＴＧ、３个ＣＡＴＧＴＧ、１个ＣＡＡＴＴＧꎬ其中ꎬ在正义

心位点[９ꎬ２７￣２８]ꎮ在ＮＣＢＩ数据库中查找ＡＤＣ、ＰＭＴ的启动子序列ꎬ利用ＰｌａｎｔＣＡＲＥ在线软件分析关键酶基因ＡＤＣ、ＰＭＴ的生物学功能ꎬ结果见图３ꎮ由图３

　第１１期吴宇瑶等:转录因子ＮｔＭＹＣ２ｂ参与烟草烟碱含量杂种优势形成的机制研究

５１

９８６ｂｐ处有２个ＣＡＴＴＴＧꎬ在正义链１０１５ｂｐ和１９８５ｂｐ处有２个ＣＡＴＧＴＧꎬ在反义链１５６６ｂｐ处有１个ＣＡＴＧＴＧꎬ在正义链５４４ｂｐ处有１个ＣＡＡＴ￣

链８２４ｂｐ处有１个ＣＡＴＴＴＧꎬ在反义链５２１ｂｐ和

ＴＧꎻ反义链１９９１ｂｐ处有１个Ｇ－ｂｏｘ元件(ＴＡＣＧＴＧ)ꎮ由此推测ꎬＮｔＭＹＣ２ｂ可能与ＡＤＣ、ＰＭＴ合调控ＡＤＣ、ＰＭＴ的表达ꎬ进而促进烟碱的合成ꎮ的顺式元件ＭＹＣ结合位点或Ｇ－ｂｏｘ元件特异性结

Ａ、Ｂ分别表示ＡＤＣ、ＰＭＴ的启动子序列ꎻ＋、－分别表示正义链和反义链ꎻ方框表示ＭＹＣ结合位点ꎻ椭圆框表示Ｇ－ｂｏｘ元件

ＡａｎｄＢｒｅｐｒｅｓｅｎｔｐｒｏｍｏｔｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＡＤＣａｎｄＰＭＴꎻ＋ａｎｄ－ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｊｕｓｔｉｃｅｃｈａｉｎａｎｄａｎｔｉｓｅｎｓｅｃｈａｉｎꎬ

ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎻＴｈｅｂｏｘｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓＭＹＣｂｉｎｄｉｎｇｓｉｔｅꎬａｎｄｔｈｅｏｖａｌｂｏｘｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓＧ￣ｂｏｘｅｌｅｍｅｎｔ

图３　关键酶基因启动子序列中的ＭＹＣ结合位点与Ｇ－ｂｏｘ元件

Ｆｉｇ.３　ＭＹＣｂｉｎｄｉｎｇｓｉｔｅａｎｄＧ￣ｂｏｘｅｌｅｍｅｎｔｉｎｋｅｙｅｎｚｙｍｅｇｅｎｅｐｒｏｍｏｔｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅ

３　结论与讨论

本根部和杂交种根部ꎬＮｔＭＹＣ２ｂ表达量分别与ＰＭＴ、ＡＤＣ表达量显著相关ꎬ其表达也与烟碱含量呈正相关ꎬ表明ＮｔＭＹＣ２ｂ可能与ＡＤＣ、ＰＭＴ启动子序列中ＭＹＣ结合位点或Ｇ－ｂｏｘ区域特异性结合来调控该基因的表达ꎬ从而参与调控烟碱的合成ꎮ

烟碱主要在根部合成ꎬ经过木质部运输到地上部ꎬ存储在液泡中ꎮ本研究发现ꎬ移栽后８０ｄꎬＮｔ￣ＭＹＣ２ｂ在烤烟亲本根中的表达量相对于移栽后６６ｄ明显上调ꎬ在杂交种根中相对于亲本平均表达量也明显上调ꎬＡＤＣ、ＰＭＴ表达量也明显上调ꎬＧＤＨ８８和巴斯玛根部烟碱含量增加ꎬ但ＮｔＭＹＣ２ｂ在亲本叶片

调控着植物根[２９]、花[３０]、果实[３１]、种子[３２]及叶脉[３３]的变化以及烟碱合成[９]等ꎮＭＹＣ２转录因子得以发挥调控作用ꎬ主要是通过结合结构基因的核心位点Ｇ－ｂｏｘ区域[９ꎬ２７￣２８]ꎮＺＨＡＮＧ等[９]研究表明ꎬ转录因子基因ＮｔＭＹＣ２ａ和ＮｔＭＹＣ２ｂ在体外也能特异性结合ＰＭＴ基因启动子的Ｇ－ｂｏｘ区域ꎬ调控ＰＭＴ基因的表达ꎮ本研究发现ꎬＡＤＣ、ＰＭＴ启动子序列中有ＭＹＣ结合位点及Ｇ－ｂｏｘ区域ꎬ且在亲

ＭＹＣ类转录因子具有多种调节功能ꎬ如ＭＹＣ２

５２

河南农业科学第４８卷

中的相对表达量低于根中的相对表达量ꎬ而叶片中的烟碱含量高于根中烟碱含量ꎬ这可能是因为烟碱在根部合成后向地上部运输ꎬ在叶中积累的结果[３４]ꎮ

[３５￣３７]

[３]　李罡ꎬ李文龙ꎬ许雪梅ꎬ等.ＭＹＣ２转录因子参与植物发

１２５￣１３２.

育调控的研究进展[Ｊ].植物生理学报ꎬ２０１９ꎬ５５(２):

[４]　张麒ꎬ陈静ꎬ李俐ꎬ等.植物ＡＰ２/ＥＲＦ转录因子家族的

研究进展[Ｊ].生物技术通报ꎬ２０１８ꎬ３４(８):１￣７.[５]　ＬＩＵＬꎬＷＨＩＴＥＭＪꎬＭＡＣＲＡＥＴＨ.Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓ

ａｎｄｔｈｅｉｒｇｅｎｅｓｉｎｈｉｇｈｅｒｐｌａｎｔｓ￣ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｄｏｍａｉｎｓꎬｅｖｏ￣ｌｕｔｉｏｎａｎｄｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ[Ｊ].ＥｕｒｏｐｅａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓ￣[６]　ＬＵＴＯＶＡＬＡꎬＤＯＤＵＥＶＡＩＥꎬＬＥＢＥＤＥＶＡＭＡꎬｅｔａｌ.

ｔｒｙꎬ１９９９ꎬ２６２(２):２４７￣２５７.

杂种优势是指杂交种在生长势、产量、抗性等性ꎬ受多基因控制ꎬ遗传机制复杂ꎮ目前ꎬ主要、超显性

[３７]

状方面优于双亲的遗传现象ꎬ在生物界普遍存在有显性

[３６]

和上位性假说

[３８]

来解释杂种

优势的形成机制ꎮ在烟碱合成代谢的２种途径中ꎬＱＰＴ参与吡啶环[３９]的形成ꎬＡＤＣ、ＯＤＣ[４０]参与吡咯环的合成ꎮ本研究发、ＰＭＴ[４１]和ＭＰＯ[４２]现ꎬＮｔ￣ＭＹＣ２ｂ与ＯＤＣ、ＡＤＣ、ＰＭＴ、ＱＰＴ在烟碱含量杂种优势较强的组合中表达量都明显上调ꎬ而在弱优势组合中ＱＰＴ下调且其他基因表达量上调也不明显ꎬ说明ＮｔＭＹＣ２ｂ参与了烟碱含量杂种优势的形成ꎬ且在杂交种中表现为超显性表达×Ｂａｓｍａ)进行转录组分析ꎮＴＩＡＮꎬ等

[４３]

(ＶＡ１１６发现烟碱合成对杂交种

代谢相关基因(ＡＤＣ、ＰＭＴ、ＭＰＯ、ＱＰＴ、ＡＯ、ＱＳ、ＱＰＴ、Ａ６２２、ＢＢＬｓ)和烟碱转运相关基因(ＪＡＴ２、ＭＡＴＥ１、

ＭＡＴＥ２、ＮＵＰ１)在杂交种中上调表达ꎬ其中大部分被证明为超显性表达ꎬ且烟碱合成代谢在杂交种中受到诱导ꎮ

本研究探讨了ＮｔＭＹＣ２ｂ与烟草烟碱含量及其杂种优势的关系ꎬ结果显示ꎬ移栽后８０ｄꎬＮｔＭＹＣ２ｂ６６在烟草亲本和杂交种根中的表达量分别较移栽后叶中烟碱含量较移栽后ｄ和亲本平均表达量呈明显上调趋势６６ｄ增加ꎮＮｔＭＹＣ２ｂꎬ且其根和在强

优势组合ＶＡ１１６×巴斯玛中的相对表达量均明显高于弱优势组合ＶＡ１１６×ＧＤＨ８８ꎬ根和叶中烟碱含量及其杂种优势表现也具有相同的趋势ꎮ另外ꎬＮｔ￣ＭＹＣ２ｂ表达量与ＡＤＣ、ＰＭＴ、ＭＰＯ表达量及烟碱含量杂种优势呈显著正相关ꎬＡＤＣ与ＰＭＴ基因中都含有ＭＹＣ结合位点和Ｇ－ｂｏｘ元件ꎮ因此ꎬ推测Ｎｔ￣ＭＹＣ２ｂ可能通过与ＡＤＣ、ＰＭＴ的顺式元件ＭＹＣ结合位点或Ｇ－ｂｏｘ元件特异性结合来调控ＡＤＣ、ＰＭＴ的表达ꎬ进而促进烟碱的合成ꎬ并且ＮｔＭＹＣ２ｂ基因的超显性表达参与了烟碱含量杂种优势的形成ꎮ

参考文献:

[１]　ＲＯＥＤＥＲｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＲｂｙＧ.ＴｈｅＲＮＡｒｏｌｅｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｏｆｇｅｎｅｒａｌⅡ[ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎＪ].ＴｒｅｎｄｓｆａｃｔｏｒｓｉｎＢｉｏ￣ｉｎ

[２]　ｃｈｅｍｉｃａｌＬＥＥＴＩꎬＹＯＵＮＧＳｃｉｅｎｃｅｓꎬ１９９６ꎬ２１(９):３２７￣３３５.

ＲＡ.Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｏｆｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｐｒｏ￣

３４(１):７７￣１３７.

ｔｅｉｎ￣ｃｏｄｉｎｇｇｅｎｅｓ[Ｊ].ＡｎｎｕａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＧｅｎｅｔｉｃｓꎬ２０００ꎬ

Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓｉｎｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｇｅｎｅｔｉｃｓａｎｄｔｈｅｅ￣

[７]　ＲＵＳＨＴＯＮ２０１５ꎬ５１(５):４４９￣４６６.

ｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆｈｉｇｈｅｒｐｌａｎｔｓ[Ｊ].ＲｕｓｓｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＧｅｎｅｔｉｃｓꎬ

ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＰＪꎬＢＯＫＯＷＩＥＣＭＴꎬＨＡＮＳꎬｅｔｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ１４７(１):２８０￣２９５.

ｉｎｔｈｅｆａｃｔｏｒｓ:ｓｏｌａｎａｃｅａｅ[ＮｏｖｅｌｉｎｓｉｇｈｔｓＪ].Ｐｌａｎｔｉｎｔｏａｌ.Ｔｏｂａｃｃｏ

Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙꎬ２００８ꎬ

ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ[８]　闫宁因[Ｊ].ꎬ张洪博中国烟草科学.烟草重要基因篇ꎬ２０１５ꎬ３６(４):１１７￣１２０.

:１０.烟草转录因子基

[９]　ＺＨＡＮＧｂａｃｃｏＨＢꎬＢＯＫＯＷＩＥＣＭＴꎬＲＵＳＨＴＯＮＰＪꎬｅｔａｌ.ｎｕｃｌｅａｒｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｍｕｌｔｉｐｌｅｃｏｍｐｌｅｘｅｓｗｉｔｈｆａｃｔｏｒｓｔｈｅＮｔＭＹＣ２ａＮｔＪＡＺ１ｒｅｐｒｅｓｓｏｒａｎｄＮｔＭＹＣ２ｂＴｏ￣

ａｎｄｆｏｒｍ[１０]　ｓｉｓ[Ｊ].ｊａｓｍｏｎａｔｅ￣ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｓｔｅｐｓｉｎｎｉｃｏｔｉｎｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅ￣ｒｅｇｕｌａｔｅＨＡＫＫＩＮＥＮＭｏｌｅｃｕｌａｒＦｕｎｃｔｉｏｎａｌａｌｋａｌｏｉｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎＳＴꎬＰｌａｎｔꎬ２０１２ꎬ５(１):７３￣８４.

ＴＩＬＬＥＭＡＮｏｆｇｅｎｅｓＳꎬŠＷＩＡＴＥＫｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎＡꎬｐｙｒｉｄｉｎｅ

ｅｔａｌ.

[１１]　ＭＡＲＴＯＮ２００７ꎬ６８(２２Ｌ/２４):２７７３￣２７８５.

ｉｎｔｏｂａｃｃｏ[Ｊ].Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ

ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＪꎬＰＥＧＧＡＥ.Ｐｏｌｙａｍｉｎｅｓａｓｔａｒｇｅｔｓｆｏｒ

[１２]　ｃｏｌꎬ１９９５ꎬ３５(１):５５￣９１.

ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ[Ｊ].ＡｎｎｕＲｅｖＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉ￣ＴＩＢＵＲＣＩＯａｓｔｈｅｓｏｕｒｃｅＡＦꎬＧＡＬＳＴＯＮｏｆｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅＡｆｏｒＷ.ｔｏｂａｃｃｏＡｒｇｉｎｉｎｅａｌｋａｌｏｉｄｓｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ

[Ｊ].[１３]　Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ１９８５ꎬ２５(１):１０７￣１１０.

ｚｙｍｅＳＡＵＮＤＥＲＳＪＷꎬＢＵＳＨｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｃｔｉｖｉｔｉｅｓａｌｋａｌｏｉｄｉｎＬＰ.Ｎｉｃｏｔｉｎｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃｅｎ￣

ｌｅｖｅｌｓＮｉｃｏｔｉａｎａ[Ｊ].ｔａｂａｃｕｍＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙꎬ１９７９ꎬ６４Ｌ.ｇｅｎｏｔｙｐｅｓｗｉｔｈ[１４]　(２):２３６￣２４０.

ＦＥＴＨｂａｃｃｏｃａｌｌｕｓＦꎬＷＡＧＮＥＲｏｆｅｎｚｙｍｅＲꎬＷＡＧＮＥＲａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆＫｔｈｅＧ.Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｎｉｃｏｔｉｎｅｐａｔｈｗａｙ

ｉｎｔｏ￣

[１５]　[Ｊ].ＳＡＴＯＰｌａｎｔａꎬ１９８６ꎬ１６８(３):４０２￣４０７.

ａｌｋａｌｏｉｄＦ.ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ[Ｊ].Ｉｎａｕｇｕｒａｌａｒｔｉｃｌｅ:ＭｅｔａｂｏｌｉｃＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｏｆｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌｏｆｐｌａｎｔ

Ａ￣[１６]　ｃａｄｅｍｙｄｏｗｎ￣ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎＣＨＩＮＴＡＰＡＫＯＲＮｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓꎬ２００１ꎬ９８(１):３６７￣３７２.

ＹꎬＨＡＭＩＬＬＪｔｙｅｄｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃＮｉｃｏｔｉａｎａｏｆｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅｔａｂａｃｕｍＮ￣ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅＤ.Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ￣ｍｅｄｉａｔｅｄ

Ｌ.ｃａｎｌｅａｄｔｏａｃｔｉｖｉ￣ＰｌａｎｔｌｅｖｅｌｓＭｏｌｅｃｕｌａｒｏｆａｎａｔａｂｉｎｅＢｉｏｌｏｇｙꎬ２００３ꎬ５３(１ａｔｔｈｅｅｘｐｅｎｓｅｅｌｅｖａｔ￣/２):８７￣１０５.

ｏｆｎｉｃｏｔｉｎｅ[Ｊ].　第１１期吴宇瑶等:转录因子ＮｔＭＹＣ２ｂ参与烟草烟碱含量杂种优势形成的机制研究

５３

[１７]　黄新杰ꎬ李章海ꎬ王能如ꎬ等.中国主要烟区烟叶烟碱

含量差异分析[Ｊ].湖南农业科学ꎬ２００６(５):３３￣３６.

[１８]　张翼翾ꎬ张一宾.新烟碱类杀虫剂新用途的探索:对

２０１３ꎬ３５(４):２３￣２６ꎬ３３.

[３１]　ＬＩＴꎬＸＵＹＸꎬＺＨＡＮＧＬＣꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｊａｓｍｏｎａｔｅ￣ａｃｔｉｖａ￣

ｔｅｄｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒＭｄＭＹＣ２ｒｅｇｕｌａｔｅｓｅｔｈｙｌｅｎｅｒｅ￣ｓｐｏｎｓｅｆａｃｔｏｒａｎｄｅｔｈｙｌｅｎｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃｇｅｎｅｓｔｏｐｒｏｍｏｔｅｅｔｈｙｌｅｎｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｄｕｒｉｎｇａｐｐｌｅｆｒｕｉｔｒｉｐｅｎｉｎｇ[Ｊ].Ｔｈｅ

[３２]　ＧＡＯＣＨꎬＱＩＳＨꎬＬＩＵＫＧꎬｅｔａｌ.ＭＹＣ２ꎬＭＹＣ３ꎬａｎｄ

ＭＹＣ４ｆｕｎｃｔｉｏｎｒｅｄｕｎｄａｎｔｌｙｉｎｓｅｅｄｓｔｏｒａｇｅｐｒｏｔｅｉｎａｃｃｕ￣ｍｕｌａｔｉｏｎｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ[Ｊ].ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏ￣

[３３]　ＨＵＡＮＧＣＦꎬＹＵＣＰꎬＷＵＹＨꎬｅｔａｌ.Ｅｌｅｖａｔｅｄａｕｘｉｎ

ｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ２０１６ꎬ１０８:６３￣７０.ＰｌａｎｔＣｅｌｌꎬ２０１７ꎬ２９(６):１３１６￣１３３４.

噻虫嗪作为多杀菌素增效剂的研究[Ｊ].世界农药ꎬ

[１９]　李晓敏ꎬ李静静ꎬ汤清波ꎬ等.烟碱对Ｂ型和Ｑ型烟粉

虱取食行为的影响:基于ＥＰＧ和液体饲囊技术体系[Ｊ].中国农业科学ꎬ２０１３ꎬ４６(１０):２０４１￣２０４９.岛:青岛大学ꎬ２００７.

[２０]　徐国华.烟碱的提取及在生物农药中的应用[Ｄ].青刘增兵展[Ｊ].ꎬ分子植物育种姜景彬ꎬ杨欢欢ꎬ２０１９ꎬ１７(１２):４１２７￣４１３４.

ꎬ等.植物杂种优势的研究进

ＢＵＴＥＬＬＩｔｏｍａｔｏｐｒｅｓｓｉｏｎｆｒｕｉｔＥꎬＴＩＴＴＡｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ２００８ꎬ２６(１１):１３０１￣１３０８.

ｏｆｓｅｌｅｃｔｗｉｔｈｈｅａｌｔｈ￣ｐｒｏｍｏｔｉｎｇＬꎬＧＩＯＲＧＩＯＭꎬｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓｅｔａｌ.Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ[Ｊ].ＮａｔｕｒｅｂｙＢｉｏ￣

ｅｘ￣ｏｆ

ＣＵＴＡＮＤＡ￣ＰＥＲＥＺｅｔＭＣꎬＡＧＥＯＲＧＥＳＡꎬＧＯＭＥＺＣｖａｔｅｓａｌ.ｔｈｅｓｉｓａＥｃｔｏｐｉｃａｎｄｎａｒｒｏｗｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｔｒａｎｓｐｏｒｔ[ｓｅｔｏｆｏｆＶｌｍｙｂＡ１ｉｎｇｒａｐｅｖｉｎｅａｃｔｉ￣Ａꎬ

Ｊ].ｇｅｎｅｓＰｌａｎｔｉｎｖｏｌｖｅｄＭｏｌｅｃｕｌａｒｉｎａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎＢｉｏｌｏｇｙꎬ２００９ꎬ

ｓｙｎ￣６９(６):６３３￣６４８.

杨堤贻构、功能及调控机制研究进展ꎬ张子敬ꎬ王大会ꎬ等.转录因子[Ｊ].河南农业科学ＫＬＦ家族的结

ꎬ

２０１９ꎬ４８(７):１￣５.

李春丽藻和甲藻ꎬ张前前[Ｊ].ꎬ中国海洋大学学报王磊ꎬ等.应用吸光度比值法识别硅

(自然科学版)ꎬ

２００７ꎬ３７(Ｓ２):１６１￣１６４.

谢瑞表达与.烟碱合成相关转录因子基因ＳＮＰ分析[Ｄ].贵阳:贵州大学ＮｔＭＹＣ２ｓꎬ２０１８.

的克隆、

ＺＨＡＮＧｈｅｌｉｘ￣ｌｏｏｐ￣ｈｅｌｉｘＨＴꎬＨＥＤＨＩＬＩＳꎬＭＯＮＴＩＥＬＧꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｂａｓｉｃ

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ｔｈａｔ[Ｊ].ＰＩＲＥＳＰｌａｎｔＪｏｕｒｎａｌꎬ２０１１ꎬ６７(１):６１￣７１.

ｈｅｌｉｘ￣ｌｏｏｐ￣ｈｅｌｉｘＮꎬＤＯＬＡＮＬ.Ｏｒｉｇｉｎａｎｄｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｂａｓｉｃ￣

＆ＧＡＳＰＥＲＩＮＩＥｖｏｌｕｔｉｏｎꎬ２０１０ꎬ２７(４):８６２￣８７４.

ｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｐｌａｎｔｓ[Ｊ].ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙｔｉｌａｙｅｒｅｄｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎＤꎬＣＨＥＴＥＬＡＴｇｒｏｗｔｈｏｆ[ｊａｓｍｏｎａｔｅＡꎬＡＣＯＳＴＡＪ].ＰＬｏＳｓｉｇｎａｌｌｉｎｇＩＦꎬｅｔａｌ.Ｍｕｌ￣

Ｇｅｎｅｔｉｃｓꎬｉｎ２０１５ꎬｔｈｅｒｅｇｕ￣(６):ｅ１００５３００.

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ｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓａｎｄｓｅｅｄ[Ｊ].ｐｒｏｄｕｃ￣ＰｌａｎｔｔｉｏｎｂｙＣｅｌｌꎬ２０１５ꎬ２７(６):１６２０￣１６３３.

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ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓＣＳｃｉｅｎｃｅｓｌｅａｖｅｓ[Ｊ].ａｎｄＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｔｒａｎｓｐｏｒｔｕｎｄｅｒｌｉｅｈｉｇｈｖｅｉｎｄｅｎｓｉｔｙｉｎ４[３４]　(３３):Ｅ６８８４￣Ｅ６８９１.ｏｆｔｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓｏｆｔｈｅｏｆＮａｔｉｏｎａｌＡｍｅｒｉｃａꎬＡｃａｄｅｍｙ２０１７ꎬ１１４ｏｆ黄劭理输与分配的影响.茎部环割处理对烤烟生长及烟碱和钾素运

[Ｄ].长沙:湖南农业大学ꎬ２０１５.[３５]　展赵阳[Ｊ].ꎬ秦智伟北方园艺ꎬ周秀艳ꎬ２０１８(８):１７２￣１８０.

ꎬ等.植物杂种优势预测研究进[３６]　ＳＨＵＬＬＪｏｕｒｎａｌｏｆＧＨｅｒｅｄｉｔｙꎬ１９０８ꎬ１(４):２９６￣３０１.

Ｈ.Ｔｈｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆａｆｉｅｌｄｏｆｍａｉｚｅ[Ｊ].[３７]　ＢＲＵＣＥａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎＡＢ.ｏｆＴｈｅｖｉｇｏｒｍｅｎｄｅｌｉａｎ[Ｊ].Ｓｃｉｅｎｃｅꎬｔｈｅｏｒｙｏｆ１９１０ꎬｈｅｒｅｄｉｔｙ３２(ａｎｄ８２７ｔｈｅ

６２７￣６２８.

):

[３８]　ＳＣＨＮＥＬＬａｒｂｉｔｒａｒｙｇｅｎｅＦＷꎬＣＯＣＫＥＲＨＡＭａｃｔｉｏｎｉｎｈｅｔｅｒｏｓｉｓＣ[Ｃ.Ｊ].ＭｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｖｅＧｅｎｅｔｉｃｓꎬ１９９２ꎬ

ｖｓ.

[３９]　１３１(２):４６１￣４６９.

ＫＡＴＯＨａｂｉｄｏｐｓｉｓＡ.ｓｔａｒｔＥａｒｌｙｓｔｅｐｓａｓｐａｒｔａｔｅｉｎｔｈｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｏｃｃｕｒｏｆｉｎＮＡＤｔｈｅｐｌａｓｔｉｄ

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[４０]　[Ｊ].ＩＭＡＮＩＳＨＩＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙꎬ２００６ꎬ１４１(３):８５１￣８５７.

ｗｉｔｈＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌＳꎬｄｉｎｇｏｒｎｉｔｈｉｎｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎＨＡＳＨＩＺＵＭＥｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅｂｙｍｅｔｈｙｌＫꎬａｎｄｊａｓｍｏｎａｔｅＮＡＫＡＫＩＴＡｏｔｈｅｒｅｎｚｙｍｅｓｏｆｇｅｎｅｓＭꎬｅｔａｌ.

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[４１]　ＰｌａｎｔＨＩＢＩＭｏｌｅｃｕｌａｒＧｅｎｅＮꎬｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＨＩＧＡＳＨＩＧＵＣＨＩＢｉｏｌｏｇｙꎬ１９９８ꎬ３８(６):１１０１￣１１１１.

ｉｎｔｏｂａｃｃｏＳꎬｌｏｗ￣ｎｉｃｏｔｉｎｅＨＡＳＨＩＭＯＴＯＴꎬｅｔａｌ.

[４２]　Ｐｌａｎｔｍｕｔａｎｔｓ[Ｊ].ＫＡＴＯＨＣｅｌｌꎬ１９９４ꎬ６(５):７２３￣７３５.

ｏｆＡꎬＳＨＯＪＩ[４３]　ａｎｄＮ￣ｍｅｔｈｙｌｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅＴꎬＨＡＳＨＩＭＯＴＯＴＩＡＮＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙꎬ２００７ꎬ４８(３):５５０￣５５４.

ｏｘｉｄａｓｅｆｒｏｍＴ.ｔｏｂａｃｃｏＭｏｌｅｃｕｌａｒ[Ｊ].ｃｌｏｎｉｎｇ

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Ｌ.ａ[Ｊ].ｃｒｉｔｉｃａｌＢＭＣｒｏｌｅＰｌａｎｔｉｎＢｉｏｌｏｇｙꎬ

ｎｉｃｏｔｉｎｅ

２０１８ꎬ１８(１):４８.

ｈｅｔｅｒｏｓｉｓ[２１]　[２２]　[２３]　[２４]　[２５]　[２６]　[２７]　[２８]　[２９]　[３０]