实验四凝胶包埋法固定化脲酶

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实验四凝胶包埋法固定化脲酶

一、实验原理

凝胶包埋法是将酶或含酶菌体包埋在各种凝胶内部的微孔中，制成一定形状的固定化酶或固定化菌体。常用的凝胶有琼脂、海藻酸钙、明胶和聚丙烯酰胺等。本实验把脲酶用聚丙烯酰胺凝胶包埋起来，制成固定化脲酶，可广泛应用于人工肾或处理尿素废水。

二、仪器和试剂

1、仪器：天平，小烧杯，刀片，滤纸等

2、试剂：

（1）丙烯酰胺

（2） N,N`-亚甲基双丙烯酰胺（交联剂）

（3）磷酸缓冲液（pH 7.0）：6.7 g Na2HPO4.2H2O，3.25 g KH2PO4，溶于蒸馏水并定容至100 ml

（4） 10%过硫酸钾溶液（引发剂）

（5） 10%亚硫酸氢钠溶液

（6）脲酶粉末（实验二制备）

三、实验步骤

1、称取丙烯酰胺2.5 g，N,N`-亚甲基双丙烯酰胺0.5 g，溶于30 ml pH 7.0的磷酸缓冲液中；

2、取上述溶液1 ml于EP管中，冰水浴中加入10 mg 脲酶，搅拌均匀，加入0.05 ml 10%过硫酸钾溶液和0.05 ml 10%亚硫酸氢钠溶液，不断搅拌下完成聚合反应，即得到含酶凝胶。

3、待凝结充分固化后，切成2-3 mm见方的小块，反复水洗后，用干滤纸吸干水，称重。置于4℃冰箱中备用。

四、实验结果

计算每克凝胶包埋酶的mg数。

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