中国医药指南２０１０年１２月第８卷第３６期ＧｕｉｄｅｏｆＣｈｉｎａＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ２０１０，Ｖｏ１．８，Ｎｏ．３６ 论 著Ｉ ２５ ＳＬＥ患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群和免疫球蛋白及补体水平的变化研究 赵向东 【摘要】目的探讨ＳＬＥ患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群、免疫球蛋白及补体水平的变化。方法采用多参数三色免疫荧光标记流式细胞术结合 血液分析仪对１３６例ＳＬＥ患者进行外周血Ｔ淋巴细胞亚群的测定，同时应用双光径免疫浊度分析仪检测其血清免疫球蛋白及补体水平。 结果与正常对照组比较，ＳＬＥ患者组外周血ＣＤ３＋Ｔ淋巴细胞、ｃＤ４ Ｔ淋巴细胞百分比明显降低 ＜Ｏ．０５），ＣＤｓ＋Ｔ淋巴细胞百分比明显 升高（Ｐ＜０．０５），ＣＤ４＋／ＣＤ８ 比值明显降低（Ｐ＜Ｏ．Ｏ１）；ＳＬＥ患者组血清ＩｇＧ显著升高（Ｐ＜Ｏ．０１），ＩｇＡ也升高（Ｐ＜０．０５），而ＩｇＭ与 对照组相比较并无明显差异（尸＞Ｏ．０５）；ＳＬＥ患者组Ｃ 、Ｃ 均显著下降 ＜Ｏ．Ｏ１）。结论与正常对照组比较，ＳＬＥ患者Ｔ淋巴细胞亚群、 免疫球蛋白及补体有明显变化。 【关键词】系统性红斑狼疮；Ｔ淋巴细胞亚群；免疫球蛋白；补体 中图分类号：Ｒ５９３．２４ １ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１６７１－８１９４（２０１０）３６－００２５—０２ Ｃｈａｎｇｅ ｏｆ Ｔ—Ｌｕｍｐｈｏｃｙｔｅ Ｓｕｂｓｅｔｓ，Ｉｍｍｕｎｃ’ｇｌｏｂｕｌｉｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｌｅｖｅｌ ｉｎ Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｂｌｏｏｄ ｏｆ Ｐａｔｉｅｎｔｓ、Ⅳｉｔｈ Ｓｙｓｔｅｍｉｃ Ｌｕｐｕｓ Ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ ＺＨＡ０Ｘｉａｎｇ－ｄｏｎｇ （Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ Ｂｌｏｏｄ Ｓｔａｔｉｏｎ，Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ ２１２００１，Ｃｈｉｎ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｓｕｂｓｅｔｓ，ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ａｎｄ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｔｈｅ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｏｆ ＳＬＥ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｓｕｂｓｅｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｆｒｏｍ １３６ ＳＬＥ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｍｕｌｔｉ—ｐａｒａｍｅｔｅｒ ｔｈｒｅｅ－ｃｏｌｏｒ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｌａｂｅｌｉｎｇ ｌｆｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｂｌｏｏｄ ａｎａｌｙｚｅｒ，ａｎｄ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ａｎｄ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｔｈｅ ｂｌｏｏｄ ｓｅｒｕｍ ｂｙ ｔｈｅ ｎｅｐｈｅｌｏｍｅｔｒｉｃ ａｎａｌｙｚｅｒ ａｔ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｔｉｍｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｈｔ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ＣＤ３＋Ｔ ａｎｄ ＣＤ４１ ｉｎ ｔｈｅ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｗａｓ ｓｉｎｇｎｉｇｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｆｏｒ ＳＬＥ ｐａｔｉｅｎｔ ｒｇｏｕｐ（Ｐ＜０．０５），ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ＣＤ８＋Ｔ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５）ａｎｄ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ＣＤ４＋／ＣＤ８ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０１）；ｉｎ ｔｈｅ ＳＬＥ ｐａｔｉｅｎｔ ｒｇｏｕｐ，ｔｈｅ ｓｅｒｕｍ ＩｇＧ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０１）ａｎｄ ＩｇＡ ａｌｓｏ ｉｎｃｅｒａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５）， ｗｈｉｌｅ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｓｉｎｇｉｉｆｃａｎｔ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ＩｇＭ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＞Ｏ．０５）；ａｎｄ Ｃ３ ｎａｄ Ｃ４ ｗｅｒｅ ｂｏｔｈ ｓｉｎｇｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ＳＬＥ ｐａｔｉｅｎｔ ｇｒｏｕｐ（尸＜０．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ａｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｈｔ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ，ＳＬＥ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｈａｖｅ ｓｉｎｇｉｉｆｃｎａｔ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｓｕｂｓｅｔｓ，ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ａｎｄ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｌｅｖｅ１． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ；Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｓｕｂｓｅｔｓ；Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ；Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ 系统性红斑狼疮（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ，ＳＬＥ）是一种伴 １．２．１．１ Ｔ淋巴细胞测定的主要试剂和仪器 有多种异常自身抗体和补体激活的自身免疫性疾病，同时细胞免疫学 ＥＰＩＣＳ．ＸＬ型流式细胞仪、ＬＨ７５０型全自动五分类血液分析仪（均 的改变与疾病的活性关系密切Ⅲ。Ｔ淋巴细胞免疫功能的改变在很大程 为美国Ｂｅｃｋｍａｎ．Ｃｏｕｌｔｅｒ公司产品），ＩＭＭＵＮＯＰＲＥＰＴＭ全血溶解试 度上反映了ＳＬＥ患者体内细胞免疫的活化状态。本研究对３９２名健康成 剂，荧光标准微球Ｆｌｏｗ－Ｃｈｅｃｋ｝以上试剂均为美国Ｂｅｃｋｍａｎ—Ｃｏｕｌｔｅｒ公 年人和１３６例ＳＬＥ患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群和免疫球蛋白及补体水平 司产品；标记单克隆抗体ＩｇＧｌ—ＦＩＴＣ／ＩｇＧ．一ＰＥ／ＩｇＧ１一ＰＣ５、Ｄ４一ＦＩＴＣ／ＣＤ８・ 进行检测，以了解其Ｔ淋巴细胞的功能和患者血清中免疫球蛋白及补 ＰＥ／ＣＤｒＰＣ为法国Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ产品。 体浓度的变化，从而为深入探讨ＳＬＥ的发病机制和判断病程及预后提 １．２．１．２免疫球蛋白（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ）及补体（Ｃ 、Ｃ ）测定的主要 供客观的实验室指标。 试剂和仪器 １对象和方法 ＩＭＭＡＧＥ型双光径免疫浊度分析仪（为美国Ｂｅｃｋｍａｎ—Ｃｏｕｌｔｅｒ公司 １．１研究对象 产品）采用该公司的配套试剂。 江苏大学附属医院２００９年３月至２０１０年７月确诊的ＳＬＥ患者１３６Ｎ。其 １．２．２样本处理 中男性１５例，女性１２１例，年龄１８￣７６岁（其中平均年龄男性为５１．６岁， １．２．２．１ Ｔ淋巴细胞测定的样本处理 女性为３１．７岁）所有病例均符合１９９７年美国风湿病学会（ＡＣＲ）修订的 取新鲜抗凝血（１．８ｍｇ／ｍＬ ＥＤＴＡ—Ｋ：抗凝）进行白细胞分类计数 ＳＬＥ诊断标准 】。采用１９９２年欧￣ＨＳＬＥ活动性评分标准判断ＳＬＥ的病情活 测定，并取１Ｏ０ Ｌ置人样品测定管，进入荧光标记单克隆抗体Ｄ 一 动性 】。３９２例正常成人静脉血液标本自镇江市中心血站的正常献血者 ＦＩＴＣ／ＣＤ －ＰＥ／ＣＤｒＰＣ ，震荡混匀，室温下避光孵育２０￣３０ｍｉｎ，应用 （记录研究对象的吸烟年限及习惯研究，并在获得研究对象知情同意后 ＣＯＵＬＴＥＲ Ｑ．ＰＲＥＰ工作站和全血溶血试剂盒对样品进行溶血处理； 采集样本），无免疫性疾病，无症状，ＨＢｓＡｇ、ＨＩＶ及梅毒检测均为阴 同时用相同方法对同型对照样本进行抗体标记（ＩｇＧ ・ＦＩＴＣ／ＩｇＧ 一ＰＥ／ 性，肝、肾功能正常，血细胞计数正常。其中男性１５３例，女性２３９例， ＩｇＧ。一ＰＣ ）、溶血处理与检测。 年龄１８￣８３岁（其中平均男性为４３．１岁，女性为３８．９岁）。 １．２．２．２免疫球蛋白（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ）及补体（ｃ 、ｃ ）测定的样本 １．２方法 １．２．１主要试剂和仪器 镇江市中心血站（２１２００１） ２６ Ｉ论 著 中国医药指南２０１０年１２月第８卷第３６期ＧｕｉｄｅｏｆＣｈｉｎａＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ２０１０，Ｖｏ１．８，Ｎｏ．３６ 表１ ＳＬＥ患者与正常对照组Ｔ淋巴细胞亚群（趸±Ｓ，％） ，＜０．０５． 尸＜０．Ｏｌ 处理 成这种结果出现的机制可能是活动期ＳＬＥ患者外周血中Ｂ细胞过量的 采新鲜静脉全血，离心（转速３０００ｒｐｍ），取血清上机检测。 １－３统计分析 应用ＳＡＳ软件（６．１２版）、采用非参数分析（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ秩和检 验），对检测数据进行统计分析，｜Ｐ＜Ｏ．０５，视为差异具有显著性。 ２结果 ２．１ ＳＬＥ患者与正常对照组Ｔ淋巴细胞亚群结果 如表ｌ所示，ＳＬＥ患者组ＣＤ 、ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞百分比降低，尤其 是ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞明显降低（Ｐ＜０．０５）；ＣＤｓ＋Ｔ淋巴细胞百分比明显 升高（Ｐ＜０．０５），ＣＤ ｃＤ 比值明显降低（Ｐ＜０．０１）。 ２．２ ＳＬＥ患者与正常对照组血清免疫球蛋白、补体检测结果 １３６例ＳＬＥ患者与３９２例正常对照组血清ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、Ｃ 、 ｃ 测定结果见表２。ＳＬＥ患者组血清ＩｇＧ、］ｇＡ水平均明显升高（Ｐ ＜０．０１，Ｐ＜０．０５），其中Ｃ 、Ｃ 水平显著降低（Ｐ＜０．Ｏ１）。 ３讨论 ＳＬＥ是一种伴有多种异常自身抗体和补体激活的累及多系统、多 器官的小血管及结缔组织的自身免疫性疾病，其病因和发病机制尚不 明确且病情复杂，疾病多呈渐进性，病程中往往复发与缓解交替出 现。大量研究表明，机体免疫功能紊乱在ＳＬＥ的发生发展过程中起着 至关重要的作用 】。 ＳＬＥ患者体内存在着免疫功能的紊乱，大量自身抗体的产生导致 血清中免疫球蛋白含量的明显升高，这是由于ＳＬＥ患者多克隆Ｂ细胞 的过度活化，促使Ｂ细胞分泌大量免疫球蛋白，致使患者体内免疫球 蛋白升高，其中以ＩｇＧ水平升高最为明显。ＩｇＭ水平正常可能与其通常 在机体炎症的早期出现有关，同时也可能是不同学者观察到的ＳＬＥ患 者血清ＩｇＭ水平结果不一的原因之一。近年来部分学者报道ＩｇＭ水平 在ＳＬＥ活动中期下降 ］。故观察体内免疫球蛋白含量有助于ＳＬＥ的诊 断。本研究结果显示，１３６例ＳＬＥ患者的ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ较健康对照组 升高，其中ＩｇＧ明显升高，ＩｇＡ也升高，而ＩｇＭ水平与健康对照组无明 显差异，与巫翠云 等人的研究结果一致。 在ＳＬＥ发病机制中发挥重要作用，大量补体可通过经典途径或替 代途径参与反应，但机体短时间内来不及制造和补充，致使Ｃ 、Ｃ 水 平显著降低。虽然目前很少有将血清补体列入病情评估标准，但近年 来国内外均有研究文献认为ＳＬＥ患者血清ｃ，、ｃ 水平与疾病活动性相 关”Ｊ。本研究结果显示，ＳＬＥ患者体内补体Ｃ 、Ｃ 水平均明显下降， 其中ｃ 水平下降更为明显，与既往研究结果一致 】。 同时，有研究表明，Ｔ淋巴细胞亚群的紊乱可能在ＳＬＥ的发生、发 展过程中发挥重要作用，ＣＤ，＋Ｔ淋巴细胞可表达与所有成熟Ｔ淋巴细 胞表面，与ＴＣＲ形成完整的ＴＣＲ／ＣＤ 复合体，共同参与对抗原刺激的 免疫应答【９】，而Ｔ淋巴细胞亚群中的ＣＤ ＋Ｔ细胞与ＣＤ ＋Ｔ细胞的相互制 约及平衡对机体免疫应答具有重要的调节作用。最近有研究表明，造 产生抗体从而损害体内物质，ＣＤ ＋Ｔ淋巴细胞参与了这一过程 “ 。 本研究结果显示，与正常对照组比较，ＳＬＥ患者ＣＤ 、ＣＤ ＋Ｔ淋巴细 胞百分比显著减少，ＣＤ。＋细胞显著增加，ＣＤ ＋／ＣＤ８＋细胞比值明显下 降，此于石永兵 等人的研究结果相符。 综上所述，ＳＬＥ患者体内存在Ｔ淋巴细胞亚群失衡，同时患者体内 免疫球蛋白含量及补体水平也有所变化，以上指标有望为辅助ＳＬＥ诊 断、检测病程和预后判断等提供更为客观、可靠的依据。 参考文献 ［１］谢红付，张慧，陈翔等．ＳＬＥ疾病活动性与补体及免疫球蛋白水 平相关性的探讨［Ｊ】．中国麻风皮肤病杂志，２００４，２０（２）：１００・１０２． 【２】Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅａ ｆｏｒ ｒｅｆｅｒｒａｌ ａｎｄ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈ— ｅｍａｔｏｓｕｓ ｉｎ ａｄｕｌｔｓ．Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｅ ｏｆ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ Ａｄ Ｈｏｃ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｉｃ Ｌｕｐｕｓ Ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｕｓｕｓ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ［Ｊ］． Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ，１９９９，４２（９）：１７８５—１７９６． ［３】Ｂｏｍｂａｒｄｉｅｒ Ｃ，Ｇｌａｄｍａｎ ＤＤ，Ｕｒｏｗｉｔｚ ＭＢ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｒｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＳＬＥＤＡＩ．Ａ ｄｉｓｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｄｅｘ ｆｏｒ ｌｕｐｕｓ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｔｈｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ Ｓｔｕｄｉｅｓ ｎｉ ＳＬＥ［Ｊ］．Ａｒｔｈｒｉｉｔｓ Ｒｈｅｕｍ，１９９２，３５（６）：６３０—６４０． ［４］孟锦焕，陆才生，张晓等．ＳＬＥ与ＲＡ患者体液免疫改变的临床观 察［Ｊ］＿现代医学，２００２，３０（５）：３２３—３２４． ［５］徐胜前，刘文涛，徐建华等．系统性红斑狼疮患者选择性ＩｇＭ降 低［Ｊ］＿中华风湿病学杂志，２００４，４（１）：３ １－３２． ［６】巫翠云，邱梅花．多种抗核抗体、免疫球蛋白、补体联合检测对 ＳＬＥ的临床意义［Ｊ］．海南医学，２００５，１６（１１）：ｌ１１． 【７】Ｈｏ Ａ，Ｂａｒｒ ＳＧ，Ｍａｇｄｅｒ ＬＳ，ｅｔ ａ１．Ａ ｄｅｃｒｅａｓｅ ｉｎ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｉｓ ａｓｓｏ— ｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｒｅｎａｌ ａｎｄ ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ［Ｊ］．Ａｕｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ，２００７，４４ （１０）：２３５０—２３５７． ［８】 龚晓彬．ＳＬＥ患者免疫学指标联合检测的ｌ临床分析［Ｊ】．中国现代 医生，２００８，４６（２８）：１３７—１３８． ［９］ 左巍，马东初，刘永海等．狼疮性肾炎患者外周血淋巴细胞亚群及 活化状态的研究［Ｊ】．细胞与分子免疫学杂志，２００１，１７（４）：３４８—３４９． ［１ ０】Ｓｉｎｇｈ ＲＥＨａｈｎ ＢＨ，Ｌａ Ｃａｖａ Ａ．Ｔｕｎｉｎｇ ｉｍｍｕｎｅ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｕｎｉｔｙ ｗｉｔｈ ｓｅｌｆ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅｓ．Ｉｎｆｌａｍｍ 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