平板计数法SOP

平板计数法SOP

1 目的

编 号 制订人 审核人 批准人 陈琛 制订日期 审核日期 批准日期 实施日期 共 4 页 2013-7-8 2013-7-9 2013-7-9 2013-7-9 颁发部门 实 验室 制订平板计数法标准操作规程，确保微生物制品中有效活菌数、杂菌率、霉菌数等微生物指标测定的准确。 2 适用范围

适用于公司产品中微生物指标的测定。 3 责任者

实验室检测操作人员。 4 内容 4.1 原理

平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个单细胞。计数时，先将待测样品作一系列稀释，再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其均匀分布于平皿中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可换算出样品中的含菌数。 4.2 材料 名称 材料 1）0.9%生理盐水：准确称取氯化钠4.5g，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至500mL，即含氯化钠0.9%。 1）无菌冻存管，无菌平皿，无菌移液器头（1ml，200ul），装有45ml无菌器材 生理盐水与玻璃珠的三角瓶。 是否灭菌 高压蒸汽灭菌 高压蒸汽灭菌 高压蒸汽灭菌 灼烧灭菌 不需灭菌 培养基 琼脂平板培养基，具体配方详见附1。 试剂 2）玻璃刮铲 3）冻存管盒，记号笔，酒精灯、移液器（1ml，200ul） 4.3 操作方法 4.3.1 编号

取无菌平皿，分别用记号笔标明连续的三个浓度，具体根据预计样品微生物数量而定，如10-7、10-8、10-9。每个浓度2-3个。 4.3.2

制板

将琼脂培养基趁热倒入已编号的无菌平皿中，5-10min凝固后倒置待用。

4.3.3 稀释

取无菌冻存管，排列于冻存管盒内，数量根据稀释浓度而定。用移液器移取1.8ml（冻存管为2ml，如冻存管为5ml，则取4.5ml）无菌生理盐水，备用。

1）液体样本：用移液器从样本中吸取0.2ml（冻存管为2ml，如冻存管为5ml，则取0.5ml。下同）溶液，移入装有1.8ml（冻存管为2ml，如冻存管为5ml，则为4.5ml。下同）无菌生理盐水水的冻存管中，震荡使菌液混合均匀，即成10-1稀释液；再用移液器吸取10-1稀释液0.2ml，移入装有1.8ml无菌生理盐水的冻存管中，震荡使菌液混合均匀，即成10-2稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液。

2）固体样本：准确称取样本5g，放入盛45ml无菌生理盐水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇约10min，使样品与水充分混合，即成10-1稀释液；用移液器吸取10-2稀释液0.2ml，移入装有1.8ml无菌生理盐水的冻存管中，震荡使菌液混合均匀，即成10-2稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液。 4.3.4

平板接种培养

用移液器吸取0.1ml菌液对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上。再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀，每个稀释度用一个灭菌刮铲，更换稀释度时需将刮铲灼烧灭菌。（图4）将涂抹好的平板平放于桌上15—30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，放入恒温培养箱中培养，至长出菌落后即可计数。每个浓度做2-3个。

4.4 计数：

计算结果时，常按下列标准从接种后的3个稀释度中选择一个合适的稀释度，求出每克/每毫升菌液中的含菌数。（1）同一稀释度各个重复的菌数相差不太悬殊。（2）以每皿30-300个菌落为宜。选择好计数的稀释度后，即可统计在平板上长出的菌落数，统计结果按下式计算。将实验结果填入《原始记录》中。

活菌数(个/g或个/ml) =同一稀释度几次重复的菌落平均数×10×稀释倍数

稀释度 样本 菌落数 样品活菌数 1 10-7 2 平均 1 10-8 2 平均 1 10-9 2 平均 4.5 报告 1、有一个在30-300间时，直接报告。

2、有两个在30-300间时,按两者菌落总数比值决定:比值小于2，取平均；比值大于2，取较少的菌落总数 所有稀释度的菌落数均大于 300，则应以稀释度最高的平板菌落数计算。

3、若所有稀释度的平均菌落数均大于300个，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 4、若所有稀释度的平均菌落数均少于30个，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 5、若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300个之间，其中一个稀释度大于300个，而相邻的另一稀释度小于30个时，则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 6、若所有的稀释度均无菌生长，报告数为每克或每毫升小于10个。

7、菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告之，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，应以四舍五入法计算。为了缩短数字后面零的个数，可用10的指数来表示。在报告菌落数为“不可计”时，应注明样品的稀释度。

5 文件发放范围

公司实验室2份，董事长，厂长，生产负责人每人1份，存档2份。 6 变更记录

上版编号 7 相关附件 上版实施日期 本次变更原因、依据及详细变更内容