鞍山师范学院学报 ２０１５—０８，１７（４）：３３—３５ 俄罗斯海参脂肪酸的气相色谱．质谱分析 关崇新，刁全平，侯冬岩，郭 华，李铁纯，回瑞华 （鞍山师范学院化学与生命科学学院，辽宁鞍山１１４００７） 摘要为了解俄罗斯海参中脂肪酸的种类及组成，采用Ｂｌｉ曲一Ｄｙｅｒ提取法对样品中脂肪油进行提取，甲 酯化后利用气相色谱一质谱联用仪进行分析测定．鉴定结果发现俄罗斯海参中含有２５种脂肪酸，其中饱和 脂肪酸８种，相对百分含量为２２．４５％；不饱和脂肪酸为１７种，相对百分含量为７７．５３％，其中ＥＰＡ和ＤＨＡ 的相对百分含量分别为９．４６％和１１．７７％． 关键词俄罗斯海参；脂肪酸；气相色谱．质谱联用 ０６５６．３１ 文献标识码Ａ 文章篇号１００８．２４４１（２０１５）０４．００３３．０３ 中图分类号海参为棘皮动物海参纲动物的总称，全世界共有１１００多种，约４０种大型体壁较厚的海参可供食 用ｌ ．海参为高蛋白质、低脂肪食品，含有多种微量元素和丰富的生理活性物质，如多肽、海参神经苷酯 等，这些生理活性物质具有抗肿瘤、抗凝血、镇痛、提高免疫力等作用ｌ ２１．多不饱和脂肪酸能使胆固醇酯 化、降低血液中胆固醇和甘油三酯、提高脑细胞的活性、增强记忆力和思维能力．海洋生物体内通常含有 丰富的多不饱和脂肪酸 ３，４ｌ，因此，对海参脂肪酸的研究具有很高的医用价值． 俄罗斯海参简称罗参，产于俄罗斯海参崴海域，也被称为极地参．由于海参崴的海水温度很低，海中 的微生物和海藻之类的食物也比较少，生长在这里的海参生长非常缓慢，需要更长的时间才能长成成 参，而且体积也要比一般的海参小很多，正因为如此，俄罗斯海参体内可以积蓄更多的营养，故其营养价 值极高．本文采用Ｂｌｉｇｈ－Ｄｙｅｒ提取方法对海参体内的脂肪油进行提取 ，然后进行甲酯化处理，再利用 气相色谱．质谱联用仪对其进行分析测定 ｊ，分离鉴定其中的脂肪酸成分． １材料与方法 １．１材料与试剂 俄罗斯海参购自鞍山某店，产地为俄罗斯．氯仿、甲醇、氢氧化钾、正己烷、硫酸钠等均为分析纯，水 为自制二次蒸馏水． １．２仪器与设备 ＨＰ６８９０ＧＣ／５９７３ Ｍｓ型气相色谱一质谱联用仪（美国惠普公司）；ＲＥ．５２Ｃ型旋转蒸发器（上海亚荣生 化仪器厂）；８５．１型恒温磁力搅拌器（常州国华电器有限公司）；８０—２Ｂ台式离心机（上海安亭科学仪器 厂）；ＫＱ一２５０Ｂ型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）． １．３方法 １．３．１脂肪油的提取 称取样品２．５０３ １ ｇ，置于干净的５００ ｍＬ三角烧瓶中，加入４５０ ｍＬ二次蒸馏 水，室温下浸泡２４ ｈ．将泡发的海参用剪刀剪碎，置于２５０ ｍＬ锥形瓶中，加入１００ ｍＬ甲醇、５０ ｍＬ氯仿 和４０ ｍＬ蒸馏水，胶塞盖紧，电磁搅拌１６ ｈ后，加入５０ ｍＬ氯仿和５０ ｍＬ蒸馏水，摇匀后过滤，分液取下 收稿日期２０１５—０６—０３ 作者简介关崇新（１９７３一），男，满族，辽宁岫岩人，鞍山师范学院化学与生命科学学院高级实验师，硕士 鞍山师范学院学报 第１７卷 层有机相，旋转蒸发回收溶剂，得脂肪油０．１３５ ８ ｇ，得油率为５．４３％。 １．３．２脂肪油的甲酯化 用１２ ｍＬ正己烷将鱼油溶解，加入２ ｍＬ浓度为０．５ ｍｏｌ／Ｌ的氢氧化钾一甲 醇溶液在７０℃水浴中回流２０ ｍｉｎ，冷却后加入１０ ｍＬ蒸馏水，超声振荡５ ｍｉｎ，然后以３ ０００ ｒ／ｒａｉｎ离 ｔｌ， ＾００ｏ０００＿【占 ｕ １０ ｍｉｎ，取上层正己烷溶液用无水硫酸钠干燥后，待ＧＣ／ＭＳ分析备用． １．３．３脂肪酸的分析鉴定 Ｈ垤 Ｅ ０ 色谱条件：色谱柱为ＨＰ一５弹性石英毛细管柱（２５ ｍＸ０．２０ ｍｉｎｘ０．３３ ｍ）；进样口温度３００℃； 程序升温：１００ ９２ ｏ０。【＝升温速率为１Ｏ℃／ｍｉｎ，２００℃ ８Ｏ℃升温速率为５￣Ｃ／ｍｉｎ，２８０ ｏＣ保持 ５ ｍｉｎ；分流比１００：１，溶剂延迟３ ｍｉｎ． 质谱条件：全扫描，四级杆质量分析器，扫描范围为２０—５００ ｍ／ｚ；离子源为电子轰击源，离子源温 度为２３０ ｏＣ；电离电压为７０ ｅＶ；电子倍增器电压为１ ９８８ Ｖ；发射电流为３４．６ ｔｚＡ；接口温度为２３０ ｃ【＝． 定性分析：取经１．３．２项处理过的样品０．４ ，用ＧＣ／ＭＳ进行分析鉴定．通过Ｇ１７０１ ＢＡ化学工作 站数据处理系统，检索ＮＩＳＴ９８谱图库，确定样品中各个化学成分． 定量分析：通过Ｇ１７０１ ＢＡ化学工作站数据处理系统，按峰面积归一化法进行定量分析，分别求得 各化学成分的相对百分含量 Ｘ＝Ａｉ／∑Ａｉｘ１００％． ２结果与讨论 ２．１俄罗斯海参脂肪酸甲酯总离子流谱图 按照步骤１．３．３进行实验，得俄罗斯海参脂肪酸甲酯总离子流谱图，如图１所示． ４肿６啪 ８啪１０￣）０ ｌ２Ｂ０ １４．∞１６啪ｌ８啪２。瑚翘∞Ｍ肋２６．∞２叠啪３０瑚 Ｔｉｍ／ｍｉｎ 图１俄罗斯海参脂肪酸甲酯总离子流色谱图 将样品中的脂肪酸种类及其相对百分含量列于表１． 对表１进行分析，从俄罗斯海参中鉴定出２５种脂肪酸，其中饱和脂肪酸８种，相对百分含量为 ２２．４５％；不饱和脂肪酸为ｌ７种，单不饱和脂肪酸为９种，相对百分含量为３４．９４％；多不饱和脂肪酸为 ８种，相对百分含量为４２．５９％．５，８，１１，１４，１７一二十碳五烯酸（ＥＰＡ）和４，７，１０，１３，１６，１９．二十二碳六烯 酸（ＤＨＡ）被称为“脑黄金”，能够对心脑血管疾病起到预防作Ｂ￣Ｉ７ Ｊ，俄罗斯海参中含量分别为９．４６％和 １１．７７％． 第４期 关崇新，等：俄罗斯海参脂肪酸的气相色谱一质谱分析 ３５ ２．２讨论 不饱和脂肪酸特别是多不饱和脂肪酸化学性质不稳定，在较高温度下长时间提取容易被氧化、变 性，本文采用Ｂｌｉｇｈ—Ｄｙｅｒ法在室温下对俄罗斯海参中脂肪油进行提取，尽量避免不饱和脂肪酸在提取过 程中的损失，提高俄罗斯海参脂肪酸分析的准确度． 参考文献 ［１］崔清晨．海洋资源［Ｍ］．北京：商务印书馆，１９８１． ［２］廖玉麟．中国动物志（第１卷）［Ｍ］．北京：科学出版社，１９９７． ［３］马亭，陈文锐，胡国昌，等．深海鱼油中脂肪酸的分析［Ｊ］．分析化学，１９９９，２７（４）：４１５—４１８． ［４］曾淑兰，关紫峰，蔡云萍，等．深海鱼油、海豹油脂肪酸组成的分析研究［Ｊ］．质谱学报，１９９９，２０（１）：７０—７５． ［５］刘希光，于华华，赵增芹，等．海蜇不同部位脂肪酸的组成分析［Ｊ］．分析化学，２００４，３２（１２）：１６３５—１６３８． ［６］刁全平，何方奕，侯冬岩，等．青虾脂肪酸的气相色谱一质谱分析［Ｊ］．鞍山师范学院学报，２０１２，１４（６）：１９—２１． ［７］陈丽花，肖作兵，周培根．中国对虾的脂肪酸分析及其营养价值评价［Ｊ］．上海海洋大学学报，２０１０，１９（１）：１２５—１２９ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｉｎ Ｒｕｓｓｉａｎ Ｓｅａ Ｃｕｃｕｍｂｅｒｓ ｂｙ ＧＣ－ＭＳ ＧＵＡＮ Ｃｈｏｎｇｘｉｎ，ＤＩＡＯ Ｑｕａｎｐｉｎｇ，ＨＯＵ Ｄｏｎｇｙａｎ，ＧＵＯ Ｈｕａ，ＬＩ Ｔｉｅｃｈｕｎ，ＨＵＩ Ｒｕｉｈｕａ （Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ａｎｓｈａｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｗｅ￣ｉ＠，Ａｎｓｈａｎ ｉａｏｎｉＬｎｇ １１４００７，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｉｎ Ｒｕｓｓｉａｎ Ｓｅａ Ｃｕｃｕｍｂｅｒｓ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｔｈｅ ｆａｔｔｙ ｏｉｌ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ Ｂｌｉｇｈ—Ｄｙｅｒ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｅｓｔｅｒｉｉｆｅｄ ｂｙ ｓｏｄｉｕｍ ｈｙｄｒｏｘｉｄｅ・ｍｅｔｈａｎｏｌ，ａｎｄ ｔｈｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｍｅｔｈａｎｏｌ ｅｓ— ｔｅｒｓ ｗｅｒｅ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｉｆｅｄ ｂｙ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ—ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ８ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ（２２．４５％）ａｎｄ １７ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ（７７．５３％）ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｉｆｅｄ ｉｎ Ｒｕｓｓｉａｎ Ｓｅａ Ｃｕｃｕｍｂｅｒｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ＥＰＡ ａｎｄ ＤＨＡ ｗｅｒｅ ９．４６％ａｎｄ １ １．７７％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｒｕｓｓｉａｎ Ｓｅａ Ｃｕｃｕｍｂｅｒｓ；ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ；Ｇａｓ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ （责任编辑：陈欣）