医学２０１０年４月 第２１卷第４期Ｍｅｄ Ｊ Ｃｈｉｎ ＰＡＰＦ，Ｖ０１．２１．Ｎ０．４．ＡＤｆｉｌ．２０１０ ３１３ ８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ对ＴＨＰ１细胞中ＡＢＣＡ１及 单核细胞趋化因子的影响 李建华 ，杨永红 ，贾军宏 ，郭志刚 ，吴平生。 【摘要１ 目的以ＴＨＰ１细胞株为靶点，研究８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ对ＡＢＣＡ１、ＭＣＰ一１基因ｍＲＮＡ和蛋白质表达及ＩＬ—ｔＢ蛋白质 的影响，阐明ＡＢＣＡ１基因在ＡＳ及泡沫细胞形成中新的可能机制。方法 复苏培养ＴＨＰ１细胞株，加入８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ（０．５ ｍｍｏＬ／Ｌ）刺激３、６、１２、２４ ｈ，荧光定量ＲＴ—ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ蛋白印迹法及ＥＬＩＳＡ法检测ＡＢＣＡ１、ＭＣＰ一１及ＩＬ一１１３ｍＲＮＡ和蛋白 表达量；用ＡＢＣＡ１的反义寡核苷酸（１００ ｎｍｏｌ／Ｌ）转染ＴＨＰ１细胞，给予上述８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ的刺激，同样的方法观察上述指标的 改变。结果予８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ刺激后，ＴＨＰ１细胞中ＡＢＣＡ１、ＭＣＰ—ｌ的ｍＲＮＡ和蛋白质水平及ＩＬ一１１３蛋白质水平均增高；给予 反义寡核苷酸转染后，８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ刺激后３、６ ｈ ＡＢＣＡ１、ＭＣＰ一１ｍＲＮＡ的表达降低，１２、２４ ｈ ＡＢＣＡ１、ＭＣＰ—ｌ及ＩＬ一１１３蛋白质 的表达水平降低。结论在８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ刺激下，ＴＨＰ１细胞中ＡＢＣＡ１可增加炎症因子表达，参与Ａｓ的发生。 【关键词】ＴＨＰＩ细胞；ＡＢＣＡ１；动脉粥样硬化；单核细胞趋化因子 【中国图书分类号】 Ｒ５４３．１２ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ ｏｎ ＡＢＣＡ１ ａｎｄ ＭＣＰ一１ ｉｎ ＴＨＰ一１ ｃｅｌｌｓ ＬＩ Ｊｉａｎｈｕａ ，ＹＡＮＧ Ｙｏｎｇｈｏｎｇ２，ＪＩＡ Ｊｕｎｈｏｎｇ ，ＧＵＯ Ｚｈｉｇａｎｇ３，ａｎｄ ＷＵ Ｐｉｎｇｓｈｅｎｇ ．１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｄｒｅ Ｗａｒｄ，Ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ ＰＬＡ，Ｂｅｒｉｎｇ １０１３０４８，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ，Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｃｏｍ－ ｍａｎｄ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００７００，Ｃｈｉｎａ；３．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，Ｎａｎｆａｎｇ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０５１５，Ｃｈｉｎａ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ＡＢＣＡ１，ＭＣＰ一１ ａｎｄ ＩＬ一１ Ｂ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ＴＨＰ１ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｗｉｔｈ ８一 Ｂｒ—ｃＡＭＰ．ａｎｄ ｔｏ ｅｌｕｃｉｄａｔｅ ａ ｎｅｗ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ＡＢＣＡ１ ｇｅｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ＡＳ ａｎｄ ｆｏａｍ ｃｅｌｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄ ＴＨＰｌ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｒｅｓｕｓｃｉｔａｔｅｄ ａｎｄ ｃｕｌｔｕｒｅｄ．８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ（０．５ｍＭ）ｗａｓ ａｄｄｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉａ ａｎｄ ＴＨＰ１ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｈａｒｖｅｓｔｅｄ ａｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｉｍｅｓ．Ｔｈｅ ｍＲＮＡ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＡＢＣＡ１，ＭＣＰ一１ ａｎｄ ＩＬ一１ Ｂ ｗｅｒｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｂｙ ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＲＴ—ＰＣＲ，Ｗｅｓｔ— ｅｌＴｌ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ａｎｄ ＥＬｌＳＡ．Ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃ１ｅｏｔｉｄｅｓ ｏｆ ＡＢＣＡ１ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ａｔ ａ ｆｉｎａｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ １０ｏｎｍｏｌ／Ｌ ｆｏｒ ａｌｌ ｔｈｅ ａｎｔｉ． ｓｅｎｓｅ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ．Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｒｅｐｅａｔｅｄ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｏｆ ＡＢＣＡ１．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｍＲＮＡ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｆｔｅｒ ｉｎｃｕｈａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｏｘ—ＬＤＬ．Ａｆｔｅｒ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｏｆ ＡＢＣＡ１．ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ａｔ ３ ａｎｄ ６ ｈ．ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ａｔ １２ ａｎｄ ２４ ｈ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＡＢＣＡ１ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｂｙ ８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ ｉｎ ＴＨＰ一１ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｓ ｉｆｌ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｇｅｎｅｓｉｓ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄ】ＴＨＰ１ ｃｅｌｌｓ；ＡｒｒＰ—Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｃａｓｓｅｔｔｅ Ａ１（ＡＢＣＡ１）；ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ ｆａｃｔｏｒ（ＭＣＰ—１） 许多学者认为，动脉粥样硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ， ＡＢＣＡ１）的细胞膜蛋白介导了过剩的细胞内胆固醇 ＡＳ）是一个血管受损伤后的炎性反应过程。基础及 从细胞内外运进入ＨＤＬ的代谢途径¨Ｊ。随着对 临床研究已表明胆固醇是引起ＡＳ和冠心病的重要 ＡＢＣＡ１研究的深入，发现ＡＢＣＡ１不仅影响血脂，还 原因，高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬ—Ｃ）水平则与冠 与ＡＳ及泡沫细胞形成有明显的关联 ，本研究以 心病的发病率呈负相关，ＨＤＬ主要通过参与体内胆 单核细胞株（ＴＨＰ１）为靶点，观察在公认的ＡＢＣＡ１ 固醇逆转运发挥抗ＡＳ作用。一种称之为ＡＴＰ一结 诱导因素８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ作用下，ＡＢＣＡ１对ＭＣＰ一１ 合盒转运蛋白１（ＡＴＰ—Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｃａｓｓｅｔｔｅ Ａ Ｉ， 及ＩＬ一１Ｂ表达的影响，以阐明ＡＢＣＡ１基因在ＡＳ 形成中新的可能机制。 基金项目：１．国家自然科学基金（３０１７１０２８）；２．广东省自然科学基 金（０１０６１６） １材料与方法 作者简介：李建华，女，１９７１年出生。博士，主治医师。主要从事血脂 １．１ 主要试剂 培养液ＲＰＭＩ１６４０、胎牛血清 与冠心病、糖尿病发病机制关系的研究。 作者单位：１．１０００４８北京，总医院第一附属医院干部病房； （Ｇｉｂｃｏｌ公司）、牛血清白蛋白（ＢＳＡ）及８一Ｂｒ— ２．１００７００北京军区总医院肾内科；３．５１０５１５广州，南方医科大学 ｃＡＭＰ（Ｓｉｇｍａ公司），细胞裂解液（１ｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ，Ｃｅｌｌ 南方医院心内科 Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ公司）、抗ＡＢＣＡ１多克隆羊抗 ３１４ 医学２０１０年４月第２１卷第４期ＭｅｄＪＣ｝ｌｉｎ ： ！： ： Ｐ 人抗体、抗ＭＣＰ一１多克隆兔抗人抗体、（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｅｈｎｏｌｏｇｙ公司）、预染蛋白Ｍａｒｋｅｒ（ＮＥＢ 公司）、ＥＣＬ Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交显影试剂盒（Ａｍｅｒｓｈａｍ 公司）、ＲＮＡ反转录试剂盒（Ｐｒｏｍｅｇａ公司）、荧光 达细胞培养同上，收集细胞，用细胞蛋白萃取液提 取各试验组的蛋白，测蛋白浓度，依照试剂盒的操作 步骤进行各组的检测。 １．２．６ ＡＢＣＡ１反义寡核苷酸处理后ＡＢＣＡ１、ＭＣＰ一 定量ＰＣＲ反应体系（ＭＪ公司）、引物合成（北京奥 科生物技术公司）、ＥＬＩＳＡ试剂盒（博士德公司）。 １．２ 方法 １、ＩＬ一１Ｂ ｍＲＮＡ和蛋白质表达的检测细胞培养同 上，将所用的细胞用ＰＢＳ清洗，加入ＲＰＭＩ １６４０培养 液１．８ ｎ１１及脂质体和反义寡核苷酸的混合物０．２ ｍｌ 实验分为８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ实验组、反 （反义寡核苷酸终浓度１００ ｎｍｏｌ／Ｌ），孵箱内培养５ ｈ 后，用ＰＢＳ清洗细胞，加入完全培养液继续培养１８ ｈ， １．２．１ 分组义寡核苷酸组。８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ实验组指８一Ｂｒ— ｃＡＭＰ（０．５ ｍｍｏｌ／Ｌ）刺激组，反义寡核苷酸组指加 入硫代修饰的反义寡核苷酸培养５ ｈ后，再加入８一 Ｂｒ—ｃＡＭＰ（０．５ ｍｍｏｌ／Ｌ）刺激组。 １．２．２ ＴＨＰ１细胞的培养及处理 复苏本实验室 已有的细胞株ＴＨＰ１，３～４代生长良好的人单核细 胞ＴＨＰ１细胞实验用，实验前以无血清的ＲＰＭＩ１６４０ 饥饿培养１２ ｈ，使实验所用细胞处于静止状态。在 无血清培养液中加入牛血清白蛋白（ＢＳＡ）２ ｒａｇ／ｍ！， 作为血清替代物，在其中加人８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ（０．５ ｍｍｏｌ／Ｌ）刺激３、６、１２、２４ ｈ，设未加刺激同时孵育２４ ｈ的细胞为阴性对照组。用细胞裂解液裂解细胞， 离心后吸取上清液用于实验。用考马斯亮蓝Ｇ一 ２５０染色法检测样本蛋白含量。 １．２．３ Ｗｅｓｔｅｒｎ蛋白印迹分析法取样本总蛋白５０ 进行变性ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳，ＡＢＣＡＩ采用 ６％的胶，ＭＣＰ一１ １２％的胶，然后电转移于ＮＣ膜上 （Ｓ＆Ｓ公司），封闭ＮＣ膜，过夜；漂洗后，ＮＣ膜在４ｃｃ 与抗ＡＢＣＡ１、ＩＣＡＭ１、ＭＣＰ一１一抗结合４ ｈ，漂洗，再 与各自的二抗结合，４￣Ｃ，２ ｈ，最后采用ＥＣＬ试剂盒显 影。预先显色的蛋白质Ｍａｒｋｅｒ（ＮＥＢ公司）用以显示 蛋白质分子量。每个试验至少重复３次。 １．２．４ ＡＢＣＡ１及ＭＣＰ一１的基因表达检测 提取 ＲＮＡ后进行反转录反应（ＲＴ）：４２ ｏＣ ６０ ｍｉｎ，９５ ｏＣ ５ ｍｉｎ，４ ｏＣ ５ ｍｉｎ。用ＭＪ荧光定量ＰＣＲ反应体系 ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ试剂盒进行ＰＣＲ：９５ Ｃｃ预变性５ ｍｉｎ； ９６℃变性２０ Ｓ，５６ ｏＣ退火２０ Ｓ，７２ ｏＣ延伸２０ Ｓ并 读板，７９ ｏＣ １ Ｓ并读板；５０个循环，７２℃总延伸５ ｍｉｎ。ＡＢＣＡ１引物为Ｓｅｎｓｅ Ｐｒｉｍｅｒ ５ ＧＡＴ ＧＧＣ ＡＡＴ ＣＡＴ ＧＧＴ ＣＡＡ ＴＧＧ ３，．Ａｎｔｉ～ｓｅｎｓｅ Ｐｒｉｍｅｒ ５ ＡＧＣ ＴＧＧ ＴＡＴ ＴＧＴ ＡＧＣ ＡＴＧ ＴＦＣ ＣＧ ３ 扩增片段长度 为２０１个碱基。ＭＣＰ一１引物为Ｓｅｎｓｅ Ｐｒｉｍｅｒ ５ ＴＣＡ ＧＣＣ ＡＧＡ ＴＧＣ ＡＡＴ ＣＡＡ ＴＧＣ ３ Ａｎｔｉ—ｓｅｎｓｅ Ｐｒｉｍ— ｅｒ５ ＴＣＣ ＴＧＡ ＡＣＣ ＣＡＣ ＴＦＣ ＴＧＣ ＴｒＧ ３ 扩增片段 长度为１８６个碱基。内参照采用Ｂ—Ａｃｔｉｎ。 １．２．５ ＥＬＩＳＡ检羽４细胞的ＭＣＰ一１、ＩＬ一１８的表 然后按照步骤加入８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ进行ｍＲＮＡ及蛋白 质的实验。ＡＢＣＡ１反义寡核苷酸的序列为：５ 一ＣＡＴ． ＴｒＧ１ＴＣＡＴＡＧＧＧＴＧＧＧＴＡＧＣＴＣ一３ 全程硫代修饰。 １．２．７ 统计学处理所有实验数据均来自３次重 复实验并复孔测定（共６次），以 ±Ｓ表示，并输入 ＳＰＳＳ１０．０统计软件包进行统计分析。不同时间点 与对照之间比较采用方差分析，以Ｐ＜０．０５为差异 有统计学意义。 ２结 果 ２．１ ８一Ｂｒ～ｃＡＭＰ对 ＩｌＨＰ１细胞ＡＢＣＡ１、ＭＣＰ一 １ｍＲＮＡ表达的影响 ８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ刺激３ ｈ后 ＡＢＣＡ１ ｍＲＮＡ表达增高，３、６、１２、２４ ｈ比对照组分别 增加１１％、３４％、２１％、１２％，与对照组比较均有统 计学差异（Ｆ：１３２．６８，Ｐ＝０．００００）；给予反义寡核 苷酸刺激后，３、６ ｈ ＡＢＣＡ１ ｍＲＮＡ较对照组分别降 低１８％、５％，与对照组比较有统计学差异（Ｆ＝ １１４．５６，Ｐ＝０．００００）。８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ刺激后，ＭＣＰ 一１ ｍＲＮＡ较对照组分别增加３３％、４６％、４４％、 １７％，与对照组比较均有统计学差异（Ｆ＝１７６．３８，Ｐ ＝０．００００）；给予反义寡核苷酸刺激后，３、６ ｈ ＭＣＰ 一１ ｍＲＮＡ分别降低３４％、６％，与对照组比较有统 计学差异（Ｆ＝８２．４５，Ｐ＝０．０００Ｏ）。 ２．２ ８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ对ＴＨＰ１细胞ＡＢＣＡｌ、ＭＣＰ一１ 蛋白表达的影响 由图１可见，８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ刺激 ３ ｈ后ＡＢＣＡ１蛋白质表达增高，３、６、１２、２４ ｈ比对照 分别增加１５％、２４％、４２．９％、３８．４％，与对照组比 较有统计学差异（Ｆ＝１０２．５６，Ｐ＝０．００００）；给予反 义寡核苷酸刺激后，１２、２４ ｈ ＡＢＣＡ１蛋白质表达较 对照组分别下降１４％、３０％，与对照组比较有统计 学差异（Ｆ＝１１４．６６，Ｐ＝０．００００）。８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ刺 激后，ＭＣＰ一１蛋白质表达较对照组分别增加 ４７．９％、４４．８％、７２．６％、３１．４％，与对照组比较有统 计学差异（Ｆ：８８．７２，Ｐ＝０．００００）；给予反义寡核苷 酸刺激后，１２、２４ ｈ后ＭＣＰ一１蛋白质表达较对照组 医学２０１０年４月第２１卷第４期Ｍｅｄ Ｊ Ｃｈｉｎ ＰＡＰＦ．Ｖｏ１．２１．Ｎｏ．４．Ａｐｒｉｌ．２０１０ ３１５ 分别下降１２％、２８％，与对照组比较有统计学差异 （Ｆ＝９３．２８，Ｐ＝０．００００）。 ２．３ ＥＬＩＳＡ检钡４ ８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ对ＴＨＰ１细胞ＭＣＰ 一１、ＩＬ一１１３表达的影响 由表１可见，８一Ｂｒ— ｃＡＭＰ刺激３ ｈ后即出现各指标增高，３、６、１２、２４ ｈ １ ＡＢＣＡｌ ２ ３ ４ ５ ＭＣＰ一１分别增加２３．９％、４０．８％、８４．９％、５７．４％： ＩＬ一１ ｐ分别增加５４．１％、６２．６％、９２．４％、３０．２％。 给予反义寡核苷酸刺激后，各组与Ｏｘ—ＬＤＬ实验组 比较均有降低，ＭＣＰ一１ １２、２４ ｈ分别降低６．９％、 ＭＣＰ．１ ■ 及ＭＣＰ一１蛋白质表达的影响 ２１．９％、３６．９％；ＩＬ一１１３１２、２４ ｈ分别降低１６．４％、 ５０．１％。以上各实验点与对照点比较差异均有统计 学意义（Ｐ＜０．０１）。相对应的６、１２、２４ ｈ时间点，反 义寡核苷酸组与Ｏｘ—ＬＤＬ实验组比较有统计学意 义（Ｐ＜０．０１）。 图１ ８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ对ＴＨＰＩ细胞ＡＢＣＡ１ １道：对照组；２、３道：８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ刺激１２、２４ ｈ；４、５道：ＡＢＣＡＩ反 义核苷酸刺激后１２、２４ ｈ 表１ ８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ对ＴＨＰ１细胞ＭＣＰ一１、ＩＬ一１ １３蛋白表达的影响 （ｐｇ／ｍｇ；ｘ± ） 注：与对照比较，①Ｐ＜０．Ｏｌ；与Ｏｘ—ＬＤＬ实验组同时间点比较，②Ｐ＜０．０５；与Ｏｘ—ＬＤＬ实验组同时间点比较，③Ｐ＜０．０ｌ ３讨 论 则ＡＳ病变明显减轻。临床研究也显示血浆ＭＣＰ一 １水平与高脂血症等心血管疾病的危险因子相关 联 ，不稳定性心绞痛患者的血浆ＭＣＰ一１水平高于 稳定性心绞痛患者，后者又高于经血管造影证明冠状 动脉正常者 。 实验以人的单核细胞株ＴＨＰＩ为研究对象，因 为ＡＳ是一个慢性的炎性反应过程 ，其发生涉及 血管内皮细胞、血管平滑肌细胞及单核／巨噬细胞。 血液单核细胞受趋化因子的作用，进入血管壁转变 为巨噬细胞，吞噬胆固醇从而成为泡沫细胞的主要 成分，在ＡＳ的形成过程中有重要的作用。 构成ＡＳ的３种主要细胞：内皮细胞、单核细 胞、平滑肌细胞都与ＭＣＰ一１密切相关。ＭＣＰ一１ 单核吞噬细胞是ＩＬ一１的主要细胞来源，ＩＬ一１ 作用于单核细胞和中性粒细胞，诱导多种细胞因子的 分泌。本实验中单核细胞在８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ的刺激下 ＩＬ一１ Ｂ增加并且与ＭＣＰ一１变化趋势相一致。Ｍｅｎｇ 等＿９＇ｍ 的实验也提示ＩＬ一１Ｂ可以显著增加人的脐静 是由内皮细胞和平滑肌细胞合成的一种趋化蛋白， 可介导单核细胞在病变部位聚集和进入血管壁。在 我们既往实验中可以看到对于人血管内皮及平滑肌 细胞，Ｏｘ—ＬＤＬ可增加ＭＣＰ一１的表达 。既往 研究显示对于不同的细胞，ｃＡＭＰ可以增加或下调 ＭＣＰ一１的表达，并且许多因子对于ＭＣＰ一１的作 用是通过ＰＦＫｓ通路而不是通过ＰＫＣ或ｃＡＭＰ通路 脉内皮细胞和牛的主动脉平滑肌细胞中ＭＣＰ一１的 表达。Ｇａｖｒｉｌｉｎ等¨ 在实验中观察到在人的单核细 胞中ＭＣＰ一１可以增加ＩＬ一１ Ｂ的表达，这可以说明 ＭＣＰ一１与ＩＬ一１Ｂ互相的诱导作用可以扩大炎性因 子在炎性反应中的作用。 ＡＢＣＡ１是作为主动参与胆固醇逆转运的蛋白被 发现的。它的突变可引起Ｔａｎｇｉｅｒ病和家族Ｉ生低ＨＤＬ 的介导。本实验中８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ可以刺激人单核 细胞中ＭＣＰ一１的表达增加，参与炎性反应及ＡＳ的 发生，这与许多研究结果相一致如在小鼠ＡＳ模型 血症，随着对它的深入研究，发现ＡＢＣＡ１在整体水平 和细胞水平的作用不一致。通过ＡＢＣＡ１敲除小鼠研 究表明：ＡＢＣＡ１基因灭活可引起普通饲料、高胆固醇 及高脂肪饲料中胆固醇吸收增加，出现类似于Ｔａｎ． 发现ＭＣＰ一１高表达，而遗传性ＭＣＰ一１缺乏的小鼠 ３１６ 医学２０１０年４月 第２ｌ卷第４期Ｍｅｄ Ｊ Ｃｈｉｎ ＰＡＰＦ，Ｖｏ１．２１，Ｎｏ．４，Ａｐｒｉｌ，２０ｌ０ ｇｉｅｒ病的病理特征 。ＡＢＣＡＩ活性的变化不仅损害 ２６（９）：１２６９—１２７２． 胆固醇的流出和降低ＨＤＬ的浓度，而且增加了冠脉 和血管疾病的易感性。Ｃｈｍｉｔｚ教授和他的同事¨ 首 先观察到当巨噬细胞内的胆固醇增加时，ＡＢＣＡ１的 表达也增加。Ｗｉｌｃｏｘ等¨ 利用原位杂交方法观察正 常人、Ａｓ患者的动脉组织，发现Ａｓ区域ＡＢＣＡ１基因 表达上调。Ｐａｎｏｕｓｉｓｌｌ 则进一步证实，巨噬细胞来源 的泡沫细胞中，ＡＢＣＡ１ ｍＲＮＡ是正常巨噬细胞的３ 倍。ＡＢＣＡ１不仅转运细胞内胆固醇，还可转运细胞 ［６］郭志刚，吴平生，李建华．巨噬细胞ＡＢＣＡＩ对ｏｘ— ＬＤＬ诱导的炎症因子的调节及其意义［Ｊ］．中山大学 学报（医学科学版），２００７，２８（１）：６—１０． ［７］Ｋｏｗａｌｓｋｉ Ｊ，Ｏｋｏｐｉｅｎ Ｂ，Ｍａｄｅｊ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｓＩ・ ＣＡＭ一１．ｓＶＣＡＭ～１ ａｎｄ ＭＣＰ一１ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｈｙ— ｐｅｒｌｉｐｏｐｒｏ ｔｅｉｎｅｍｉａ ＩＩａ ａｎｄ—ＩＩｂ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａ－ ｃｏｌ Ｔｈｅｒ，２００１，３９（２）：４８—５２。 ［８］ Ｍａｚｚｏｎｅ Ａ，Ｄｅ Ｓｅｒｖｉ Ｓ，Ｍａｚｚｕｅｅｈｅｌｌｉ Ｉ，ｅｔ ａ１．Ｉｎ— ｃｒｅａｓｅｄ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ｉｎ ｕｎ— 内ＩＬ一１及氧自由基等物质。因此可见，ＡＢＣＡ１可能 具有抗ＡＳ和致ＡＳ双重作用。 Ｋａｐｌａｎｌｌ 对ＡＢＣＡＩ表达的信号转导机制研究 表明，ｐ３８抑制药（ＰＤ１６９３１６）显著降低ＴＨＰ—ｌ细 胞中脂多糖诱导的ＡＢＣＡ１的表达，表明ｐ３８可增加 ＡＢＣＡ１的表达。 ８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ为ＡＢＣＡ１公认的诱导因素，本 实验显示：８一Ｂｒ—ｃＡＭＰ可引起ＴＨＰ１细胞中ＡＢ— ＣＡ１、ＭＣＰ一１及ＩＬ一１１３ｍＲＮＡ、蛋白质表达增加， ＡＢＣＡ１的反义寡核苷酸抑制ＡＢＣＡ１表达后，ＭＣＰ１ 及ＩＬ一１８的ｍＲＮＡ及蛋白质的表达水平也随之降 低。结果表明在ＴＨＰ１细胞中ＡＢＣＡ１可增加ｃＡＭＰ 诱导的炎性因子表达，参与ＡＳ的发生。结合以上 资料我们设想在人的单核细胞ＴＨＰ１中可能存在 ｃＡＭＰ—ｐ３８ ｃｘ—ＡＢＣＡ１一ＩＬ一１ Ｂ通路，继而导致 ＩＣＡＭ—Ｉ、ＭＣＰ—Ｉ增力Ⅱ。 总之，在整体水平，ＡＢＣＡ１具有增加高密度脂 蛋白胆固醇及逆胆固醇转运作用，从而抗ＡＳ，但在 细胞水平，ＡＢＣＡ１还具有增加炎性因子表达的作 用，其深人的机制值得进一步研究。 【参考文献】 ［１］ Ｏｒａｍ Ｊ Ｆ．ＡＴＰ—ｂｉｎｄｉｎｇ ｃａｓｓｅｔｔｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ＡＩ ａｎｄ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｔｒａｆｉｆｃｋｉｎｇ［Ｊ］．Ｃｕｒｔ Ｏｐｉｎ ｉｎ Ｌｉｐｉｄ，２００２，１３ （４）：３７３—３８１． ［２］ Ｓｏｕｍｉａｎ Ｓ，Ｇｉｂｂｓ Ｒ，Ｄａｖｉｅｓ Ａ，ｅｔ ａ１．ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓ— ｓｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｌｉｐｉｄ ｅｆｆｌｕｘ ａｎｄ ｍａｔｒｉｘ ｄｅｇｒａｄａ— ｔｉｏｎ ｉｎ ｏｃｃｌｕｓｉｖｅ ａｎｄ ｅｃｔａｔｉｃ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈｏｌ，２００５，５８（１２）：１２５５—１２６０． ［３］ Ｒｏｓｓ Ｒ．Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ａｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ，１９９９，３４０（２）：１１５～１１９． ［４］李建华，杨永红，郭志刚，等．血管内皮细胞中ＡＢＣＡＩ 的表达及其在动脉粥样硬化发生中的意义［Ｊ］．第一 军医大学学报，２００４，２４（９）：９８０—９８３． ［５］郭志刚，李建华，吴平生．巨噬细胞中ＡＢＣＡ１对炎症 因子的调节及其意义［Ｊ］．南方医科大学学报，２００６， ｓｔａｂｌｅ ａｎｇｉｎａ：ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗｉｔｈ ｓｅｒｕｍ ｔｒｏｐｏｎｉｎ Ｔ［Ｊ］． Ｈｅａｒｔ，２００１，８５（５）：５７１—５７５． ［９］Ｍｅｎｇ Ｆｅｎｇ，Ｄｅｎｇ Ｄｕａｎｒｉ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＩＬ一１ｂｅｔａ，ＴＮＦ— ａｌｐｈａ ａｎｄ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＣＰ一 １ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｖｅｉｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｚｈｏｎｇ－ ｈｕａ Ｂｉｎｇ Ｌｉ Ｘｕｅ Ｚａ Ｚｈｉ，２０００，２９（１）：４６—４８． ［１０］ Ｍｅｎｇ Ｆｅｎｇ，Ｄｅｎｇ Ｄｕａｎｒｉ，Ｎｉ Ｊ．Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１ ｂｅｔａ， ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ—ａｌｐｈａ ａｎｄ ｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｉｎ— ｄｕｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ一１ ｉｎ ｃａｌｆ ａｏ￣ｉｃ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｊ Ｔｏｎｇｊｉ Ｍｅｄ Ｕｎｉｖ，２０００，２０（１）：３６—３８． ［１１］Ｇａｖｒｉｌｉｎ Ｍ Ａ，Ｄｅｕｃｈｅｒ Ｍ Ｆ，Ｂｏｅｃｋｍａｎ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｎ－ ｏｃｙｔｅ ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ １ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＩＬ——１ ｂｅｔａ ｅｘ－－ ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ，２０００，２７７（１）：３７—４２． ［１２］ ＭｃＮｅｉｓｈ Ｊ，Ａｉｅｌｌｏ Ｒ Ｊ，Ｇｕｙｏｔ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐ— ｏｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ａｎｄ ｆｏａｍｅｅｌｌ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ ＡＴＰ—－ｂｉｎｄｉｎｇ ｃａｓｓｅｔｔｅ ｔｒａｎｓ・・ ｐｏｒｔｅｒ一１［Ｊ］．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ，２０００，９７（８）：４２４５ ４２５０． ［１３］Ａｎｎａ Ｅ，Ｂｏｒｔｎｉｃｋ，Ｇｏｒｇｅ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＡＴＰ—ｂｉｎｄｉｎｇ Ｃａｓｓｅｔｔｅ １ ｍＲＮＡ ｌｅｖｅｌｓ ｗｉｔｈ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｅｆｌｆｕｘ ｆｒｏｍ ｖａｒｉｏｕｓ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２０００， ２７５（３７）：２８６３４—２８６４０． ［１４］ Ｗｉｌｃｏｘ Ｊ Ｎ，Ｃｏｕｓｅ Ｔ Ｌ，Ｗａｄｅ Ｄ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＡＴＰ—ｂｉｎｄｉｎｇ ｃａｓｓｅｔｔｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ｌ（ＡＢＣ１） ｉｎ ｕｏｒｎｌａｌ ａｎｄ ａｔｈｅｍｓｅｌｅｒｏｔｉｃ ｔｉｓｓｕｅｓ『Ｊ］．Ａｒｔｅｒｉｏｓｅｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ，２００１，２１（３）：３７８—３８５． ［１５］Ｐａｎｏｕｓｉｓ Ｃ Ｇ，Ｚｕｃｋｅｍ１ａｎ Ｓ Ｈ．Ｉｍｅｒｆｅｍｎ一￣ｉｎｄｕｃｅｓ ｄｏｗｎ－ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔａｎｇｉｅｒ ｄｉｓｅａｓｅｇｅｎｅ（ＡＴＰ—ｂｉｎｄｉｎｇ—ｃａｓｓｅｔｔｅ ｔｒｎａｓｏｐｒｔｅｒ１）ｉｎ ｍａｅｍｐｈａｇｅ ｄｅｉｒｖｅｄ ｆｏａｍ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ａｒｔｅｒｉｏ－ ｓｃｌｅｒ ３ｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ，２０ＯＯ，２０（６）：１５６５—１５７１． ［１６］Ｋａｐｌａｎ Ｒ，Ｇａｎ Ｘ，Ｍｅｎｋｅ Ｊ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｂａｃｔｅｒｉｌａ ｌｉｐｏｐｏ－ ｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｉｎｄｕｃｅｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡＢＣＡＩ ｂｕｔ ｎｏｔ ＡＢ－ ＣＧ１ ｖｉａ ａｎ ＬＸＲ—ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．Ｊ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ，２００２，４３（６）：９５２—９５９． （２００９—１１—１８收稿２００９—１２—２７修回） （责任编辑梁秋野）
